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      你是不是和上面的師弟有相同的苦惱，搞不定RNA這個(gè)磨人的小妖精，經(jīng)常出現(xiàn)辛辛苦苦提的RNA又降解了，質(zhì)檢又沒通過(guò)的情況。為什么提的RNA總是不合格？ 今日作為師姐的小編就給我們整理一下RNA提取時(shí)的注意事項(xiàng)，輕松幫你搞定傲嬌的RNA分子，So easy~

為什么RNA易降解？

RNA簡(jiǎn)略降解有內(nèi)因也有外因，從本身結(jié)構(gòu)來(lái)說(shuō)RNA是單鏈分子，本身很不安穩(wěn)，別的RNA分子2’方位上有游離的羥基，易構(gòu)成2’，3’-環(huán)形磷酸鹽中心產(chǎn)品，易分化。從外因來(lái)看RNase無(wú)處不在，并且RNase本身熱安穩(wěn)性高、不簡(jiǎn)略失活。RNase就像堅(jiān)強(qiáng)的小強(qiáng)，怎樣打都不死。

RNA提取注意事項(xiàng):

1、資料的取用與保存：

取用準(zhǔn)則：“現(xiàn)用現(xiàn)取”，資料離體后趕快進(jìn)行RNA提取。
保存條件：液氮、-80℃冰箱、干冰。
保存作用：液氮> -80℃冰箱>干冰。
樣品分裝：按試驗(yàn)需求最小量保存多份，防止重復(fù)凍融。

2、試驗(yàn)器具使用：

在RNA提取進(jìn)程中但凡與RNA接觸到的器皿都必須是RNase-free的，具體可通過(guò)以下兩種辦法取得：
DEPC處理失活RNase：用含有DEPC的水浸泡試驗(yàn)器皿失活RNase，然后進(jìn)行高溫滅菌。

直接購(gòu)買RNase-free的試驗(yàn)耗材：適用于經(jīng)費(fèi)足夠的試驗(yàn)室，定心可靠。

3、提取辦法挑選：

RNA提取最常用的是TRIzol法和試劑盒法，二者各有好壞，可根據(jù)研討意圖進(jìn)行挑選。

試劑盒法：
長(zhǎng)處：操作簡(jiǎn)略、入門簡(jiǎn)略，新手必備。

缺陷：柱提取法提取的RNA有長(zhǎng)度的局限性, 小RNA在提取進(jìn)程中簡(jiǎn)略丟掉。別的，不同的試劑盒適用物種不同，使用時(shí)需謹(jǐn)慎挑選。

TRIzol法：
長(zhǎng)處：提取成本低，適用物種廣泛，操作者可根據(jù)不同試驗(yàn)資料的特色靈敏調(diào)整試驗(yàn)進(jìn)程達(dá)到最優(yōu)的提取作用，適用于經(jīng)驗(yàn)豐富的科研老司機(jī)。

缺陷：操作進(jìn)程繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)。

4、試驗(yàn)人員操作：
提取RNA時(shí)應(yīng)配戴口罩和手套，防止皮膚上的RNase污染樣品。
試驗(yàn)進(jìn)程遵循操作快、加樣準(zhǔn)的準(zhǔn)則。
主張?zhí)崛〗?jīng)驗(yàn)不足的試驗(yàn)人員防止一次性操作幾十個(gè)RNA樣品，簡(jiǎn)略造成不同樣品間的平行性差別的，操作時(shí)刻添加也會(huì)添加RNA降解的危險(xiǎn)。

5、RNA試驗(yàn)環(huán)境建立：

最好建立RNA專用的試驗(yàn)環(huán)境包含試驗(yàn)臺(tái)和離心機(jī)等，削減不同試驗(yàn)環(huán)境下RNase的穿插污染。
防止將RNA長(zhǎng)時(shí)刻暴露于高溫環(huán)境。通常情況下，RNA 分子本身常常發(fā)作折疊構(gòu)成安穩(wěn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，防止被降解，高溫環(huán)境有助于RNA分子二級(jí)結(jié)構(gòu)的翻開，使RNA變得不安穩(wěn)，因而要防止。