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TRI LS Reagent液體樣品總RNA抽提試劑(TRIzol LS Reagent)

TRI Liquid Sample Total RNA Isolation Reagent(TRIzol LS Reagent)

包裝規(guī)格：

本產(chǎn)品僅用于科研，禁止用于醫(yī)藥、臨床醫(yī)療、食品和化妝品等用途。

產(chǎn)品介紹：
TRI LS Reagent液體樣品總RNA抽提試劑，能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。適用于人，動植物，酵母，細(xì)菌和病毒的液體樣品中提取總RNA的試劑。也可以從動物組織、 植物材料、 各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA。在加入氯仿離心后，會分成三層，RNA 分布在上清水相層。收集上清水相后，經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。
可直接用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A篩選、體外翻譯、構(gòu)建cDNA文庫等各種分子生物學(xué)實驗。

產(chǎn)品特點：
無污染：整套試劑盒采用RNase-Free處理。
適用廣：適用于動物組織，植物組織，各種微生物和培養(yǎng)細(xì)胞等各類樣品材料的RNA提取。
特殊性：適用于提取液體樣品的總RNA。
易操作：操作簡便，提取過程僅需 30 分鐘左右。 
吸附柱：含有特異性吸附柱。通過漂洗－離心－洗脫的步驟提取。
高質(zhì)量：有效保證RNA的完整性，回收RNA 效率高，純度高，沒有蛋白和其他雜質(zhì)污染。OD260/OD280的比值可達1.9~2.2，可用于各種分子生物學(xué)實驗。

操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項） 
樣品處理：
1.生物液體：每250μl液體樣品（血清，血漿，腦脊液等）加入750μl TRI LS Reagent，用移液器吹打混勻樣品，裂解樣品中細(xì)胞。每5~10×106 個細(xì)胞至少加入750μl TRI LS Reagent。確保TRI LS Reagent和樣品的體積比總是3：1。
2.動物組織：取新鮮或－80°C凍存動物組織盡量剪碎，每50~100mg組織加入750μl TRI LS Reagent，勻漿儀進行勻漿處理。或在液氮中研磨后加入750μl TRI LS Reagent混勻。如果組織樣品的體積小于250μl，加入滅菌水將組織樣品體積調(diào)整到250μl。確保TRI LS Reagent和樣品的體積比總是3：1。
3.植物組織：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或?qū)⒅参锝M織剪碎后直接在TRI LS Reagent中迅速研磨，每50~100mg組織加入750μl TRI LS Reagent，如果組織樣品的體積小于250μl，加入滅菌水將組織樣品體積調(diào)整到250μl。確保TRI LS Reagent和樣品的體積比總是3：1。
4.貼壁細(xì)胞：直接在培養(yǎng)板中加入裂解液裂解細(xì)胞，按培養(yǎng)板面積每10cm2加入300~400μl TRI LS Reagent，用移液器吹打混勻，直到看不到明顯的細(xì)胞團為止。裂解液加入量不足會有DNA污染。
5.懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞。每5 ~ 10×106動物、植物和酵母細(xì)胞或每1×107細(xì)菌細(xì)胞加入750μl TRI LS Reagent混勻。如果懸浮細(xì)胞液的體積小于250μl，加入滅菌水將組織樣品體積調(diào)整到250μl。確保TRI LS Reagent和樣品的體積比總是3：1。用移液器吹打混勻，直到看不到明顯的細(xì)胞團為止。不需要洗滌，避免mRNA降解。

提取步驟：
1.將勻漿樣品劇烈震蕩后，室溫靜置5分鐘以使核蛋白體完全解離。
2.可選步驟： 在4°C的條件下以12,000 rpm的離心力離心10分鐘，取上清。（當(dāng)樣品富含蛋白質(zhì)、脂肪、多糖或是細(xì)胞外物質(zhì)例如肌肉、脂肪組織或植物的塊莖部分時可能需要額外的分離步驟。）
3.每750μl TRI LS Reagent加200μl氯仿。蓋緊管蓋，劇烈震蕩15秒并將其在室溫靜置3分鐘。
4.在4°C 12,000rpm 離心10分鐘，樣品會分成三層：下層有機相，中間層和上清水相層，RNA存在于上清水相層中。
5.將上清水相轉(zhuǎn)移到新的離心管中，加入等體積異丙醇。 顛倒混勻后室溫靜置10分鐘。（不要吸取沉淀物和漂浮物。漂浮物可能會黏附在槍頭的外壁，注意不能將其帶入離心管中。）
6.4°C 12,000 rpm 離心10分鐘，棄上清，此時在管壁或管底形成膠裝沉淀。
7.加入75%乙醇洗滌沉淀。每使用750μl TRI LS Reagent用1ml 75%乙醇對沉淀進行震動渦旋洗滌。
8.在室溫或者4°C 12,000 rpm離心3分鐘，棄上清，注意不要吸取RNA沉淀。剩余的少量液體可短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸取沉淀。
9.室溫靜置2 ~ 3分鐘。加入30 ~ 100μl RNase-free H2O，充分溶解RNA，得到的RNA保存在－80°C，防止降解。

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