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蛋白質(zhì)電泳相關(guān)試劑、緩沖液的配制方法

30% (W/V) Acrylamide(丙烯酰胺)

□組份濃度  30%(W/V)Acrylamide

□配制量   1 L

□配制方法  

1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。

Acrylamide	290 g
BIS(雙丙烯酰胺)	10 g

2.向燒杯中加入約600 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?

3.加去離子水將溶液定容至l L，用0.45 μm濾膜濾去雜質(zhì)。

4.于棕色瓶中4℃保存。

注意：丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性，并可通過(guò)皮膚吸收，其作用具有積累性，配制時(shí)應(yīng)戴手套等。聚丙烯酰胺無(wú)毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因?yàn)橛锌赡芎猩倭康奈淳酆铣煞荨?

40% (W/V) Acrylamide(丙烯酰胺)

□組份濃度  40% (W/V) Acrylamide

□配制量   1 L

□配制方法  

1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。

Acrylamide	380 g
BIS	20 g

2.向燒杯中加入約600 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?

3.加去離子水將溶液定容至l L，用0.45 μm濾膜濾去雜質(zhì)。

4.于棕色瓶中4℃保存。

注意：丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性，并可通過(guò)皮膚吸收，其作用具有積累性，配制時(shí)應(yīng)戴手套等。聚丙烯酰胺無(wú)毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因?yàn)橛锌赡芎猩倭康奈淳酆铣煞荨?

10% (W/V) AP (過(guò)硫酸銨)

□組份濃度  10%(W/V)AP過(guò)硫酸銨

□配制量    10 ml

□配制方法  

1.稱取1 g過(guò)硫酸銨AP。

2.加入10 ml的去離子水后攪拌溶解。

3.貯存于4℃。

注意：10%過(guò)硫酸銨溶液在4℃保存時(shí)可使用2周左右，超過(guò)期限會(huì)失去催化作用。

5×Tris-Glycine Buffer(SDS-PAGE電泳緩沖液)

□組份濃度 0.125 MTris，1.25 MGlycine(甘氨酸)，0.5%(W/V)SDS

□配制量   1 L

□配制方法  

1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。

Tris	15.1 g
Glycine	94 g
SDS	5.0 g

2.加入約800 ml的去離子水，攪拌溶解。

3.加去離子水將溶液定容至1 L后，室溫保存。

2×SDS-PAGE Loading Buffer

□組份濃度

100 mM	Tris-HCl(pH6.8)
100 mM	β-巰基乙醇(2-ME)
4%(W/V)	SDS
0.2%(W/V)	溴酚蘭(BPB)
20%(V/V)	甘油

□配制量    5 ml

□配制方法  

1.量取下列試劑，置于10 ml塑料離心管中。

0.25 MTris-HCl(pH6.8)	0.25 ml
β-巰基乙醇	0.5 ml
SDS	0.2 g
甘油	1 ml
1%溴酚蘭	0.1 ml，

2.加去離子水溶解后定容至5 ml。

3.小份(500 μl/份)分裝后，于室溫保存。

4.加入β-巰基乙醇 的Loading Buffer可在室溫下保存一個(gè)月左右

5×SDS-PAGE Loading Buffer

組份濃度

250 mM	Tris-HCl(pH6.8)
10%(W/V)	SDS
0.5%(W/V)	BPB
50%(V/V)	甘油
5%(V/V)	β-巰基乙醇(2-ME)

配制量    5 ml

配制方法  1.量取下列試劑，置于10 ml塑料離心管中。

1 MTris-HCl(pH6.8)	1.25 ml
SDS	0.5 g
BPB	25 mg
甘油	2.5 ml

2.加去離子水溶解后定容至5 ml。

3.小份(500 μl/份)分裝后，于室溫保存。

4.使用前將25 μl的2-ME加到每小份中。

5.加入2-ME的Loading Buffer可在室溫下保存一個(gè)月左右。

考馬斯亮藍(lán)R-250染色液

□組份濃度  0.1%(W/V)考馬斯亮藍(lán)R-250,25%(V/V)異丙醇,10%(V/V)冰醋酸

□配制量   1 L

□配制方法 

1.稱取1 g考馬斯亮藍(lán)R-250，置于1 L燒杯中。

2.量取250 ml的異丙醇加入上述燒杯中，攪拌溶解。

3.加入100 ml的冰醋酸，攪拌均勻。

4.加入650 ml的去離子水，攪拌均勻。

5.用濾紙除去顆粒物質(zhì)后，室溫保存。

考馬斯亮藍(lán)染色脫色液    

 □組份濃度   10%(V/V) Ethanoic acid醋酸，5%(V/V)乙醇

 □配制量    1 L

 □配制方法   

1.量取下列溶液，置于l L燒杯中。

Ethanoicacid醋酸	100 ml
5% (V/V)乙醇	50ml
dH2O	850ml

2.充分混合后使用。

凝膠固定液(SDS-PAGE銀氨染色用)

□組份濃度   50%(V/V)甲醇，10%(V/V) Ethanoic acid 醋酸

□配制量     1L

□配制方法   

1.量取下列試劑，加入1L的試劑瓶中。

甲醇	500 ml
Ethanoicacid	100 ml
dH2O	400 ml

2.均勻混合后室溫保存。

凝膠處理液(SDS-PAGE銀氨染色用)

□組份濃度   50%(V/V)甲醇，10%(V/V)戊二醛

□配制量     100 ml

□配制方法   

1.量取下列試劑，加入100~200 ml的試劑瓶中。

甲醇	50 ml
戊二醛	10 ml
dH2O	40 ml

2.均勻混合后室溫保存。

凝膠染色液(SDS-PAGE銀氨染色用)

□組份濃度   0.4%（W/V）AgNO3, 1%（V/V）濃氨水（濃NH3·H2O）, 0.04%（W/V）NaOH

□配制量     100 ml

□配制方法   

1.量取下列試劑，加入100~200 ml的試劑瓶中。

20% AgNO3	2 ml
濃NH3·H2O	1 ml
4% NaOH	1 ml
dH2O	96 ml

2..均勻混合。該溶液應(yīng)為無(wú)色透明狀。如氨水濃度過(guò)低時(shí)溶液會(huì)呈現(xiàn)混濁狀，此時(shí)應(yīng)補(bǔ)加濃氨水，直至透明。

3.本染色液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，不宜保存。

顯影液  (SDS-PAGE銀氨染色用)

□組份濃度   0.005%(W/V)檸檬酸，0.02%(V/V)甲醛

□配制量    1 L

□配制方法   

1.稱量下列試劑，置于l L試劑瓶中。

檸檬酸	50 mg
甲醛	0.2 ml

2.加入1 L去離子水后，搖動(dòng)混合溶解。

3.室溫保存。