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昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)項(xiàng)目榮獲昆山小核酸及生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)園三創(chuàng)大賽三等獎(jiǎng)！

來(lái)源：Genenode|君諾德公司發(fā)布時(shí)間：2019-06-26 Hits：9085

昆山小核酸及生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)園三創(chuàng)大賽

2019年6月25日，2019?昆山小核酸及生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)園三創(chuàng)大賽落下帷幕。本次大賽共征集來(lái)自中國(guó)、美國(guó)、新加坡、以色列等地各類(lèi)項(xiàng)目近60個(gè)。經(jīng)過(guò)層層選拔，“昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)項(xiàng)目”最終榮獲三等獎(jiǎng)。昆山市發(fā)展改革委副主任萬(wàn)繼民、昆山陽(yáng)澄湖科技園管委會(huì)副主任奚國(guó)鋒等領(lǐng)導(dǎo)出席了大賽。

項(xiàng)目背景介紹：

昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)BEVS介紹

昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)（Baculovirus Expression Vector System－BEVS）廣泛應(yīng)用于科研和工業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域。與其他常用的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)相比，昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)具有外源基因表達(dá)水平高、易于表達(dá)異源多聚體蛋白、安全性等優(yōu)勢(shì)，表達(dá)的重組蛋白通常具有正確的翻譯后修飾和生物學(xué)活性，如二硫鍵的形成、磷酸化、糖基化等等。同時(shí)昆蟲(chóng)細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)，容易放大培養(yǎng)，有利于大規(guī)模表達(dá)重組蛋白。

Genenode君諾德公司，國(guó)內(nèi)獨(dú)家提供自產(chǎn)的第二代昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)產(chǎn)品Super ibac，包括桿狀病毒DNA（Super ibac DNA），轉(zhuǎn)移載體(pIAT)，對(duì)照轉(zhuǎn)移載體(pIAT GFP)和Super ibac DNA Kit。相較于其他類(lèi)似產(chǎn)品，我們價(jià)格更優(yōu)惠，供貨更迅速，同時(shí)還可以提供更快速、高效、經(jīng)濟(jì)的昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)重組蛋白服務(wù)，自主研發(fā)生產(chǎn)的桿狀病毒表達(dá)試劑盒可以達(dá)到更高的重組蛋白表達(dá)水平，經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員能夠?yàn)槟扑]最適合的服務(wù)，迅速解決在表達(dá)純化過(guò)程中遇到的問(wèn)題。

技術(shù)原理:

Super iBac系統(tǒng)是一個(gè)全新的生產(chǎn)重組桿狀病毒的技術(shù)平臺(tái)，免去了從親代病毒中篩選重組病毒的步驟，不需要進(jìn)行空斑實(shí)驗(yàn)，一步法桿狀病毒蛋白表達(dá)系統(tǒng)，是目前最領(lǐng)先的桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)。

通過(guò)對(duì)桿狀病毒DNA的復(fù)制必需基因進(jìn)行修改，使其不能在昆蟲(chóng)細(xì)胞中正常復(fù)制，只有和對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)移載體同源重組，修復(fù)其復(fù)制必需基因，才能在昆蟲(chóng)細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制，只有當(dāng)Super ibac DNA和攜帶目的基因的轉(zhuǎn)移載體pIAT成功同源重組后，才能在昆蟲(chóng)細(xì)胞中復(fù)制存活，因此共轉(zhuǎn)染昆蟲(chóng)細(xì)胞后無(wú)需任何篩選，重組率為100%，一步法轉(zhuǎn)染，簡(jiǎn)單快速，尤其經(jīng)過(guò)基因改造后，重組蛋白更穩(wěn)定,蛋白生物活性更高，適合分泌蛋白，膜蛋白，毒性蛋白等難表達(dá)的蛋白。

第二代昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)技術(shù)特點(diǎn):

1.重組蛋白表達(dá)水平高（最高可達(dá)細(xì)胞總蛋白的50%），大多數(shù)為有生物功能的可溶性蛋白；

2.真核表達(dá)系統(tǒng)，重組蛋白生物學(xué)活性高，能同時(shí)表達(dá)多個(gè)外源基因；

3.可進(jìn)行翻譯后修飾:磷酸化修飾, 形成正確折疊的二硫鍵, 進(jìn)行N-和O-型糖基化修飾

4.表達(dá)人源化蛋白，昆蟲(chóng)細(xì)胞中糖基化途徑克服人源糖蛋白的問(wèn)題。

5.大多數(shù)昆蟲(chóng)細(xì)胞系在不加血清培養(yǎng)基中快速生長(zhǎng)，得到高滴度病毒和高產(chǎn)量重組蛋白；

6.相對(duì)于其他真核表達(dá)系統(tǒng)成本較低，硬件設(shè)施成本低接近于原核表達(dá)，無(wú)需CO2培養(yǎng)箱，無(wú)需血清培養(yǎng)基；

7.規(guī)?；囵B(yǎng)簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)，適合自動(dòng)化生產(chǎn)，昆蟲(chóng)細(xì)胞比哺乳動(dòng)物細(xì)胞操作簡(jiǎn)單；

8.商業(yè)化的BEVS系統(tǒng)讓病毒重組及蛋白表達(dá)變得更簡(jiǎn)單；

不同蛋白表達(dá)系統(tǒng)的比較：

	優(yōu)點(diǎn)	缺點(diǎn)
大腸桿菌	遺傳背景清楚、培養(yǎng)費(fèi)用低、耐受能力強(qiáng)、抗污染能力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、適用范圍廣	缺乏蛋白質(zhì)翻譯后加工機(jī)制; 目的蛋白常以包涵體形式釋放，產(chǎn)物純化困難，表達(dá)的蛋白生物活性低
哺乳動(dòng)物細(xì)胞	表達(dá)的蛋白能進(jìn)行翻譯后修飾并正確的折疊；能組成性或誘導(dǎo)性地表達(dá)目的蛋白；目的蛋白更接近天然狀態(tài)，適用于表達(dá) 完整的大分子	表達(dá)量低、操作繁瑣、成本較高、不適合用于蛋白大規(guī)模生產(chǎn)
酵母細(xì)胞	生長(zhǎng)繁殖速度快，培養(yǎng)條件普通，可大規(guī)模生產(chǎn)，成本相對(duì)低能夠得到折疊及修飾后的蛋白質(zhì) 高水平表達(dá)蛋白質(zhì) 可克服異源蛋白降解	大多的重組蛋白表達(dá)效率較低、過(guò)度糖基化
昆蟲(chóng)桿狀病毒	高效重組：重組率100% 能同時(shí)表達(dá)多個(gè)外源基因表達(dá)產(chǎn)量高，超過(guò)50%蛋白可被表達(dá) 可進(jìn)行翻譯后的各種修飾相比如其他表達(dá)系統(tǒng)，該系統(tǒng)成本低，硬件設(shè)施要求低，無(wú)需CO2培養(yǎng)箱，無(wú) 需血清培養(yǎng)基培養(yǎng)簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)，適合自動(dòng)化生產(chǎn)

不同桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)介紹（BEVS）

第一代表達(dá)系統(tǒng): Bac-to-Bac	1.需要先在大腸桿菌系統(tǒng)中生產(chǎn)重組病毒, 篩選純化后再轉(zhuǎn)染昆蟲(chóng)細(xì)胞; 2.重組效率非常低，大量篩選工作。
第一代表達(dá)系統(tǒng): BacPAK6/BaculoGold	1.將桿狀病毒DNA線性化, 引入多個(gè)Bsu361限制性酶切位點(diǎn); 2.Bsu361不能100%切割病毒DNA使之線性化, 重組病毒仍需要進(jìn)行空斑篩選。
第一代表達(dá)系統(tǒng): BaculoDirect	1.桿狀病毒DNA線性化； 2.需要利用更昔洛韋（核苷類(lèi)似物）篩選重組病毒，對(duì)細(xì)胞有毒性； 3.重組效率低，需要好幾輪的擴(kuò)繁。
第二代表達(dá)系統(tǒng): Superibac(Genenode)	1.高效重組：重組率100%,經(jīng)基因改造,僅重組病毒才能成活,無(wú)需加抗生素和任何篩選工作； 2.蛋白質(zhì)量高：經(jīng)基因改造,提高分泌蛋白效率，重組蛋白更穩(wěn)定,蛋白生物活性更高； 3.適用于難表達(dá)的蛋白：分泌蛋白，膜蛋白，毒性蛋白；

轉(zhuǎn)染GFP基因：

轉(zhuǎn)染GFP基因 Bac-Bac

桿狀病毒宿主細(xì)胞：

細(xì)胞系	來(lái)源	應(yīng)用	培養(yǎng)基
Sf-9	Spodopterafrugiperda Sf-9 (Pupal ovarian tissue)	重組桿狀病毒生產(chǎn) 胞內(nèi)蛋白表達(dá) 空斑分析	Sf-900II/III SFM HyQ SFX
Sf-21	Spodopterafrugiperda Sf-21 (Pupal ovarian tissue)	胞內(nèi)蛋白表達(dá) 重組分泌蛋白	Sf-900II/III SFM ESF-921 HyQ SFX
Hi-5	Trichoplusiani Hi-5 (Ovarian cells)	重組分泌蛋白	EX-CELL 405 Express Five SFM HyQ SFX
Tri-Ex	Sf-9 derivative	胞內(nèi)蛋白表達(dá)	TriEX

桿狀病毒DNA的選擇：

桿狀病毒DNA	特點(diǎn)
Super ibac S DNA	適合通用蛋白表達(dá)，尤其適合糖基化蛋白，分泌蛋白，膜蛋白，毒性蛋白等難表達(dá)的蛋白
Super ibac P DNA	專(zhuān)門(mén)開(kāi)發(fā)用于表達(dá)蛋白生產(chǎn)病毒顆粒（VLP），也適用于胞質(zhì)蛋白的表達(dá)。

產(chǎn)品線（咨詢(xún)電話18518676727[微信]）：

貨號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	產(chǎn)品規(guī)格	目錄價(jià)	備注
200818	Super ibac S DNA	5rnx	7357.5	桿狀病毒DNA
202818	Super ibac S DNA Kit	5rnx	8982.5	試劑盒(all-in-one kit)
201801	pIAT1	3μg	812.5	轉(zhuǎn)移載體
201802	pIAT2	3μg	812.5	pIAT2轉(zhuǎn)移載體
201803	pIATGFP	25μl	812.5	pIATGFP對(duì)照轉(zhuǎn)移載體
200816	Super ibac P DNA	5rnx	6570	桿狀病毒DNA
202816	Super ibac P DNA Kit	5rnx	8195	試劑盒(all-in-one kit)

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	優(yōu)點(diǎn)	缺點(diǎn)
大腸桿菌	遺傳背景清楚、培養(yǎng)費(fèi)用低、耐受能力強(qiáng)、抗污染能力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、適用范圍廣	缺乏蛋白質(zhì)翻譯后加工機(jī)制; 目的蛋白常以包涵體形式釋放，產(chǎn)物純化困難，表達(dá)的蛋白生物活性低
哺乳動(dòng)物細(xì)胞	表達(dá)的蛋白能進(jìn)行翻譯后修飾并正確的折疊；能組成性或誘導(dǎo)性地表達(dá)目的蛋白；目的蛋白更接近天然狀態(tài)，適用于表達(dá) 完整的大分子	表達(dá)量低、操作繁瑣、成本較高、不適合用于蛋白大規(guī)模生產(chǎn)
酵母細(xì)胞	生長(zhǎng)繁殖速度快，培養(yǎng)條件普通，可大規(guī)模生產(chǎn)，成本相對(duì)低能夠得到折疊及修飾后的蛋白質(zhì) 高水平表達(dá)蛋白質(zhì) 可克服異源蛋白降解	大多的重組蛋白表達(dá)效率較低、過(guò)度糖基化
昆蟲(chóng)桿狀病毒	高效重組：重組率100% 能同時(shí)表達(dá)多個(gè)外源基因表達(dá)產(chǎn)量高，超過(guò)50%蛋白可被表達(dá) 可進(jìn)行翻譯后的各種修飾相比如其他表達(dá)系統(tǒng)，該系統(tǒng)成本低，硬件設(shè)施要求低，無(wú)需CO2培養(yǎng)箱，無(wú) 需血清培養(yǎng)基培養(yǎng)簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)，適合自動(dòng)化生產(chǎn)

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