技術(shù)服務(wù)

Luciferase報告基因檢測服務(wù)，采用熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)，以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(firefly luciferase)活性。該系統(tǒng)的檢測原理是，熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在熒光素氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光，然后可以通過熒光測定儀也稱化學(xué)發(fā)光儀或液閃測定儀測定熒光素氧化過程中釋放的生物熒光，熒光閃爍總數(shù)與樣品中存在熒光素酶的活性成正比。

實(shí)驗(yàn)流程：
1.構(gòu)建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達(dá)序列前方的報告基因質(zhì)粒，如psiCHECK等。 
2.將要檢測的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒與報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞或其它相關(guān)的細(xì)胞系。如果此轉(zhuǎn)錄因子能夠激活靶啟動子，則熒光素酶基因就會表達(dá)，熒光素酶的表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄因子的作用強(qiáng)度成正比。 
3.加入特定的熒光素酶底物，熒光素酶與底物反應(yīng)，產(chǎn)生熒光，通過檢測熒光的強(qiáng)度可以測定熒光素酶的活性，從而判斷轉(zhuǎn)錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。 

應(yīng)用范圍：檢測轉(zhuǎn)錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA的相互作用

應(yīng)用領(lǐng)域
1.熒光素酶基因標(biāo)記基因
2.熒光素酶基因標(biāo)記細(xì)胞
3.熒光素酶基因標(biāo)記微生物
4.活體生物體內(nèi)成像
5.藥物篩選
6.雙報告基因系統(tǒng)

技術(shù)特點(diǎn)：
1.采用Promega公司特有psiCHECK質(zhì)粒；
2.所采用的Luciferase雙熒光報告系統(tǒng)，可以獲得寬泛的線性定量范圍與極高的靈敏度；
3.采用瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)，操作簡便、快速，周期短，適用于絕大多數(shù)細(xì)胞類型。

服務(wù)流程：
1.PCR擴(kuò)增靶基因的Promoter，或直接合成結(jié)合位點(diǎn)序列； 
2.片段裁切或點(diǎn)突變設(shè)計靶基因的Promoter并以PCR擴(kuò)增，或直接合成序列； 
3.將上述不同DNA片段分別克隆至報告載體pGL4質(zhì)粒； 
4.將報告載體轉(zhuǎn)染待檢細(xì)胞； 
5.多功能酶標(biāo)儀檢測報告基因的表達(dá)水平。

客戶提供：
1.miRNA與靶基因的信息；
2.相應(yīng)檢測細(xì)胞株。

最終提交結(jié)果：
1.克隆含有靶基因3’UTR或結(jié)合位點(diǎn)序列的報告質(zhì)粒； 
2.檢測結(jié)果與完整的實(shí)驗(yàn)報告。