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M-MuLV Reverse Transcriptase(RNase Hˉ,42℃,55℃)

產(chǎn)品編號：P4201A/B

產(chǎn)品規(guī)格：5KU/10KU

產(chǎn)品價(jià)格：210/390

包裝：支

儲存條件：F

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M-MuLV Reverse Transcriptase(RNase Hˉ,42℃,55℃)

產(chǎn)品規(guī)格：

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	目錄價(jià)
P4201A-5	M-MuLV Reverse Transcriptase(RNase Hˉ,42℃,55℃)	5KU	210
P4201A-10	M-MuLV Reverse Transcriptase(RNase Hˉ,42℃,55℃)	10KU	390
P4201B-5	M-MuLV Reverse Transcriptase(RNase Hˉ,42℃,55℃)	5KU	300
P4201B-10	M-MuLV Reverse Transcriptase(RNase Hˉ,42℃,55℃)	10KU	500

一、產(chǎn)品介紹：
本制品使用通過基因重組技術(shù)克隆表達(dá)的點(diǎn)突變型RNase H活性缺失的M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶TRUEscript Hˉ RTase。野生型的M-MuLV 包含的RNase H活性能夠催化降解DNA/RNA雜合體中的RNA，因此在cDNA第一條鏈的合成反應(yīng)中可能會降解RNA/DNA雜合體中的模板RNA。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，與M-MuLV 相比，具有更強(qiáng)的延伸能力和穩(wěn)定性，可用于較長的cDNA合成以及高比例的全長cDNA文庫的構(gòu)建等。

二、適用范圍：
第一鏈cDNA合成?？捎糜诘涂截惢虻臋z測。

三、特點(diǎn)：
合成cDNA片段長度最高可達(dá)12 kb。

四、第一鏈cDNA合成：(以20 μl反應(yīng)體系為例)
1.加入

Components	Volume
Total RNA/mRNA	50 ng-5 μg/5-500 ng
Oligo(dT)₁₈(0.5 μg /μl)or	1 μl
Random Primer(0.1 μg/μl) or	1 μl
GSP(Gene Specific Primer)	2 pmol
dNTP Mixture (10 mM each)	1 μl
5× RT Buffer	4 μl
RNase Inhibitor(40 units/μl)	0.5 μl
TRUEscript Hˉ RTase	0.8-1μl (見注意事項(xiàng)4)
RNase free H₂O to final volume	20 μl

2. 輕輕混勻
如用Oligo(dT)18或基因特異引物(GSP)，42℃孵育30-50min。
如用Random Primer，25℃孵育10 min，42℃孵育30-50 min。
3. 65℃加熱15 min(或者85℃加熱5 min)失活TRUEscript Hˉ RTase。

五、RT-PCR：
建議取1/10-1/5 體積(2-4 μl)的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為PCR模板。
建議PCR條件(以50 μl反應(yīng)體系為例)

Components	Volume	Final Concentration
cDNA Template	2 μl	as required
Forward Primer (10 μM)	1 μl	0.2 μM each
Reverse Primer (10 μM)	1 μl	0.2 μM each
10×Taq Buffer (含Mg2+)	5 μl	1×
2.5 mM dNTPs	4 μl	0.2 mM
Taq DNA Polymerase	0.5 μl	2.5 units
ddH2O to final volume	50 μl	Not applicable

七、注意事項(xiàng)：
1.避免RNase污染。
2.為保證反轉(zhuǎn)錄成功建議使用高質(zhì)量的RNA樣品。
3.如果RNA模板GC含量豐富或者有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)，可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混勻，65℃變性5分鐘，冰上冷卻，短暫離心后加入其它成分繼續(xù)下面的反轉(zhuǎn)錄步驟。
4.TRUEscript Hˉ RTase非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸頭外導(dǎo)致?lián)p失，用前請點(diǎn)甩離心后使用，并且避免吸頭外壁沾附損失。可以每次按照0.8μl使用，也不影響使用效果。

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