產(chǎn)品中心

PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒(離心柱型)

PCR Product DNA Purification Kit(Column)

包裝規(guī)格：

一.產(chǎn)品介紹：
   在高離序鹽存在的情況下，DNA片斷選擇性的吸附于離心柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜上，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，去蛋白液和漂洗液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質(zhì)去除，最后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

二.產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜采用進(jìn)口公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)結(jié)合液，不含傳統(tǒng)結(jié)合液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.結(jié)合液加酚紅調(diào)制成為了黃顏色，便于監(jiān)測(cè)pH值變化從而達(dá)到最佳結(jié)合效果，大大提高回收效率。
  快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。

三.適用范圍：
   適用于PCR反應(yīng)產(chǎn)物、酶切產(chǎn)物DNA片段、探針標(biāo)記純化回收，DNA樣品濃縮等。

四.儲(chǔ)存條件：
1.所有的溶液應(yīng)該是澄清的，如果環(huán)境溫度低時(shí)溶液可能形成沉淀，此時(shí)不應(yīng)該直接使用，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。使用前應(yīng)該恢復(fù)到室溫
2.儲(chǔ)存于低溫（4℃或者－20℃）會(huì)造成溶液沉淀，影響使用效果，因此運(yùn)輸和儲(chǔ)存均在室溫下（15℃-25℃）進(jìn)行。
3.避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

五.注意事項(xiàng)：
1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。
2.結(jié)合液中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要立即用大量清水或者生理鹽水沖洗。
3.回收純化的DNA片段一般在100bp到40kb之間，過長(zhǎng)、過短片段的回收效率迅速降低。
4.回收DNA的量和起始DNA的量，洗脫體積，DNA片斷大小有關(guān)。一般1-15μg， 100bp-5kb的DNA片段，回收率可高達(dá)95％。
5.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA， 不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫， 但應(yīng)該確保pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫，DNA片段應(yīng)該保存在－20℃。DNA片段如果需要長(zhǎng)期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。

關(guān)于平衡液的使用
1.介紹：核酸吸附硅膠膜柱子長(zhǎng)期放置過程中會(huì)同空氣中的電荷/塵埃發(fā)生反應(yīng)而影響其核酸的結(jié)合能力。硅膠柱經(jīng)平衡液預(yù)處理后可大大減少柱子中硅膠膜的憎水基團(tuán)，提高核酸的結(jié)合能力。從而提高硅膠柱子回收效率或者產(chǎn)量。平衡液是強(qiáng)堿性溶液，若不小心碰到，請(qǐng)用大量自來水清洗。用完后需蓋緊瓶蓋，以免接觸空氣。室溫保存。在保存過程中可能有沉淀生成，請(qǐng)加熱至37℃使沉淀完全消失。
2.使用方法：取一個(gè)新的硅膠膜吸附柱子裝在收集管中，吸取100μl的平衡液至柱子中。13000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中廢液，將吸附柱子重新放回收集管。此時(shí)平衡液預(yù)處理柱子完畢。接后續(xù)的操作步驟。

六.操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）
提示：第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB中加入指定量無水乙醇，加入后請(qǐng)及時(shí)打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!

1.每100μl PCR擴(kuò)增后體系或者酶切后體系加入500μl結(jié)合液BB，充分混勻。（如果初始體系小于100μl，請(qǐng)事先用雙蒸水調(diào)整至100μl）。
平衡液預(yù)處理吸附柱：
使用平衡液預(yù)處理硅膠膜吸附柱為必做步驟，具體方法參見前文“關(guān)于平衡液的使用”

2.將上一步所得溶液加入吸附柱EC中（吸附柱放入收集管中），室溫放置1分鐘，12,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。
過濾下的結(jié)合液和收集管內(nèi)殘存的強(qiáng)堿性平衡液結(jié)合后，溶膠液可能會(huì)從黃色變成橘紅甚至紫色，此為酚紅PH指示劑堿性條件下的正常顏色變化。

3.加入600μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。

4.加入600μl漂洗液WB，12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。

 
5.將吸附柱EC放回空收集管中，12,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

6.取出吸附柱EC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加50μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好），室溫放置2分鐘，12,000rpm 離心1分鐘。如果需要較多量DNA，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，離心1分鐘。

洗脫體積越大，洗脫效率越高。如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是最小體積不應(yīng)少于25μl，體積過小降DNA洗脫效率，減少產(chǎn)量。