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實驗常用培養(yǎng)基的配制方法

1、Ampicillin（100mg/ml）

□組份濃度 100mg/ml Ampicillin （100mg/ml）              

□配制量  50mL
□配置方法 

1. 稱量5gAmpicillin置于50mL離心管中。
2. 加入40mL滅菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 用0.22μm濾膜過濾除菌。
4. 小份分裝（1mL/份）后，-20℃保存。

2、IPTG（24mg/ml）

□組份濃度  24mg/mL IPTG（24mg/mL）            

□配制量   50mL
配置方法  

1.稱量1.2gIPTG置于50mL離心管中。
2. 加入40mL滅菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 用0.22μm濾膜過濾除菌。 
4. 小份分裝（1mL/份）后，-20℃保存。

3、X- Gal（20mg/ml）

□組份濃度 20mg/mL X- Gal （20mg/mL）             

□配制量  50mL
□配置方法 

1. 稱取1gX-Gal置于50mL離心管中。
2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 小份分裝（1mL/份）后，-20℃避光保存。

4、LB培養(yǎng)基

□組份濃度

1%（W/V）	Tryptone
0.5%（W/V）	Yeast Extract
1%（W/V）	NaCl

□配制量  1L
□配置方法 

1. 稱量下列試劑，置于1L燒杯中

Tryptone	10g
Yeast Extract	5g
NaCl	10g

2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。
3. 滴加5N NaOH（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。
4. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

5、LB/Amp培養(yǎng)基     

□組份濃度  

1％（W/V）	Tryptone
0.5％（W/V）	Yeast Extract
1％（W/V）	NaCl
0.1mg/mL	Ampicillin

□配制量  1L
□配置方法 

1. 稱量下列試劑，置于1L燒杯中

Tryptone	10g
Yeast Extract	5g
NaCl	10g

2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。
3. 滴加5N NaOH（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。
4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。 
5. 高溫高壓滅菌后，冷卻至室溫。
6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均勻混合，4℃保存。

6、TB培養(yǎng)基            

□組份濃度     

1.2％（W/V）	Tryptone
2.4％（W/V）	Yeast Extract
0.4％（V/V）	Glycerol
17mM	KH2PO4
72mM	K2HPO4

□配制量1L

□配置方法 

1. 配制磷酸鹽緩沖液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

溶解2.31gKH2PO4和12.54g K2HPO4于90ml的去離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至100ml，高溫高壓滅菌。
2.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。 

Tryptone	12g
Yeast Extract	24g
Glycerol	4mL

3. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。
4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，高溫高壓滅菌。
5. 待溶液冷卻至60℃以下時，加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液。
6.4℃保存。

7、TB/Apm培養(yǎng)基   

□組份濃度              

1.2％（W/V）	Tryptone
2.4％（W/V）	Yeast Extract
0.4％（V/V）	Glycerol
17mM	KH2PO4
72mM	K2HPO4
0.1mg/mL	Ampicillin

□配制量1L

□配置方法

1. 配制磷酸鹽緩沖液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

溶解2.31gKH2PO4和12.54gK2HPO4于90mL的去離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至100mL，高溫高壓滅菌。 
2. 稱取下列試劑，置于1L燒杯中。

Tryptone	12g
Yeast Extract	24g
Glycerol	4mL

3. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。
4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，高溫高壓滅菌。

5. 待溶液冷卻至60℃以下時，加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液和1mL Ampicillin（100mg/mL）。
6. 均勻混合后4℃保存。

8、SOB培養(yǎng)基        

□組份濃度                                   

2％（W/V）	Tryptone
0.5％（W/V）	Yeast Extract
0.05％（W /V）	NaCl
2.5mM	KCl
10mM	MgCl2

□配制量1L
□配置方法

1. 配制250mMKCl溶液。 

在90mL的去離子水中溶解1.86gKCl后，定容至100mL。
2. 配制2MMgCl2溶液。

在90mL的去離子水中溶解19gMgCl2后，定容至100mL，高溫高壓滅菌。

3. 稱取下列試劑，置于1L燒杯中。 

Tryptone	20g
Yeast Extract	5g
NaCl	0.5g

4. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。

5 量取10mL250 mMKCl溶液，加入到燒杯中。 
6. 滴加5N NaOH溶液（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。
7. 加入去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。
8. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。
9. 使用前加入5mL滅菌的2MMgCl2溶液。

9、SOC培養(yǎng)基         

□組份濃度                                     

2％（W/V）	Tryptone
0.5％（W/V）	Yeast Extract
0.05％（W /V）	NaCl
2.5mM	KCl
10mM	MgCl2
20mM	葡萄糖

□配制量 100mL
□配置方法

1. 配制1M葡萄糖溶液。將18g葡萄糖溶于90mL去離子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22μm濾膜過濾除菌。
2. 向100mL SOB培養(yǎng)基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均勻混合。

3.4℃保存。

10、2×YT培養(yǎng)基   

□組份濃度 

1.6％（W/V）	Tryptone
1％（W/V）	Yeast Extract
0.5％（W/V）	NaCl

□配制量   1L
□配置方法 

1.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。

Tryptone	16g
Yeast Extract	10g
NaCl	5g

2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。
3. 滴加5N NaOH，調(diào)節(jié)pH值至7.0。
4. 加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。
5. 高溫高壓后，4℃保存。

11、Φb×broth培養(yǎng)基

□組份濃度

2％（W/V）	Tryptone
0.5％（W/V）	Yeast Extract
0.5％（W/V）	MgSO4?7H2O

□配制量1L 

□配置方法 1.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。

Tryptone	20g
Yeast Extract	5g
MgSO4?7H2O	5g

2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。            

3. 滴加1N KOH，調(diào)節(jié)pH值至7.5。
4. 加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。
5. 高溫高壓后，4℃保存。

12、NZCYM培養(yǎng)基 

□組份濃度

0.5％（W/V）	Yeast Extract
0.1％（W/V）	Casamino Acid
1％（W /V）	NZ胺
0.5％（W /V）	NaCl
0.2％（W /V）	MgSO4?7H2O

□配制量   1L
□配置方法 1.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。

Yeast Extract	5g
Casamino Acid	1g
NZ胺	10g
NaCl	5g
MgSO4?7H2O	2g

2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。
3. 滴加5N NaOH溶液（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。
4. 加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。
5. 高溫高壓后，4℃保存。 

13、NZYM培養(yǎng)基     

□組份濃度

0.5％（W/V）	Yeast Extract
1％（W /V）	NZ胺
0.5％（W /V）	NaCl
0.2％（W /V）	MgSO4?7H2O

 □配置方法

NZYM培養(yǎng)基除不含Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份與NZCYM培養(yǎng)基相同。

1.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。

Yeast Extract	5g
NZ胺	10g
NaCl	5g
MgSO4?7H2O	2g

2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。 
3. 滴加5N NaOH溶液（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。 
4. 加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。 
5. 高溫高壓后，4℃保存。 

14、NZM培養(yǎng)基       

□組份濃度 

1％（W /V）	NZ胺
0.5％（W /V）	NaCl
0.2％（W /V）	MgSO4?7H2O

□配置方法 

NZM培養(yǎng)基除不含Yeast Extract（酵母提取物）外，其他成份與NZYM培養(yǎng)基相同。

1.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。

NZ胺	10g
NaCl	5g
MgSO4?7H2O	2g

2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。 
3. 滴加5N NaOH溶液（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。 
4. 加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。 
5. 高溫高壓后，4℃保存。 

15、一般固體培養(yǎng)基的配制

□配置方法 

1. 按照液體培養(yǎng)基配方準備好液體培養(yǎng)基，在高溫高壓滅菌前，加入下列試劑中的一種。

Agar（瓊脂：鋪制平板用）	15g/L
Agar（瓊脂：配制頂層瓊脂用）	7g/L
Agarose（瓊脂糖：鋪制平板用）	15 g/L
Agarose（瓊脂糖：配制頂層瓊脂用）	7g/L

2.高溫高壓滅菌后，帶上手套取出培養(yǎng)基，搖動容器使瓊脂或瓊脂糖充分混勻（此時培養(yǎng)基溫度很高，小心燙傷）。  
3. 待培養(yǎng)基冷卻至50～60℃時，加入熱不穩(wěn)定物質(zhì)（如抗生素），搖動容器充分混勻。
4. 鋪制平板（30～35mL培養(yǎng)基/90mm培養(yǎng)皿）。

16、LB/Amp/X-Gal/IPTG 平板培養(yǎng)基 

□組份濃度                  

1％（W /V）	Tryptone
0.5％（W/V）	Yeast Extract
1％（W/V）	NaCl
0.1mg/mL	Ampicillin
0.024mg/mL	IPTG
0.04mg/mL	X-Gal
1.5％（W /V）	Agar

□配制量1L
□配置方法 1. 稱取下列試劑，置于1L燒杯中。

Tryptone	10g
Yeast Extract	5g
NaCl	10g

2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。
3. 滴加5N NaOH溶液（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。 
4. 加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，加入15g Agar。
5. 高溫高壓滅菌后，冷卻至60℃左右。
6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均勻混合。 
7. 鋪制平板（30～35mL培養(yǎng)基/90mm培養(yǎng)基）。
8. 4℃保存平板。

17、TB/Amp/X-Gal/IPTG 平板培養(yǎng)基

□組份濃度                    

1.2％（W /V）	Tryptone
2.4％（W/V）	Yeast Extract
0.4％（W/V）	Glycerol
17mM	KH2PO4
72mM	K2HPO4
0.1mg/mL	Ampicillin
0.024mg/mL	IPTG
0.04mg/mL	X-Gal
1.5％（W /V）	Agar

□配制量1L
□配置方法 

1.配制磷酸鹽緩沖液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

溶解2.31gKH2PO4和12.54gK2HPO4于90mL的去離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至100mL，高溫高壓滅菌。 
2. 稱取下列試劑，置于1L燒杯中。

Tryptone	12g
Yeast Extract	24g
Glycerol	4mL

3. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。
4. 加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，加入15g Agar。
5. 高溫高壓滅菌后，冷卻至60℃左右。
6. 加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液、1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均勻混合。 
7. 鋪制平板（30～35mL培養(yǎng)基/90mm培養(yǎng)基）。 
8. 4℃保存平板。