產(chǎn)品中心

尿液基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)

Urine DNA Extraction Kit(Column)

包裝規(guī)格：

一.產(chǎn)品介紹：
    尿液中DNA來自于尿道中脫落的細胞，用尿液DNA進行分子生物學基礎研究和臨床診斷有很多特殊的優(yōu)點：1）尿液收集物是非介入、無創(chuàng)傷性的。2）從尿液中提取DNA要比從血液中提取DNA更加簡單。本產(chǎn)品就是專門用于從尿液中提取基因組DNA的產(chǎn)品，提取的DNA可直接用于PCR反應。本產(chǎn)品具有下列特點： 

二.產(chǎn)品特點：
1.操作簡單，整個過程室溫操作約20分鐘，適合大規(guī)模樣品處理。 
2.DNA產(chǎn)率女性一般為50-200 ng/mL尿液，男性一般為3-50 ng/mL尿液。 
3.所提取的DNA純凈，可直接用于PCR、DNA甲基化鑒定、癌癥檢測等。 
4.安全無毒，本試劑盒對人體無毒，無腐蝕性和刺激性氣味。 
5.性價比高，質(zhì)量和國外同類產(chǎn)品相當，但價格更便宜。

三.儲存條件：
1.結合液CB或者抑制物去除液IR低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2.為避免降低活性，方便運輸，提供蛋白酶K為凍干粉狀，收到后，可短暫離心后，加入1毫升滅菌水溶解。因為反復凍融可能會降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分裝凍存，－20℃保存。
3.避免試劑長時間暴露于空氣中發(fā)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

四.注意事項：
1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可以達到13,000 rpm的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。
2.需要自備異丙醇。
3.開始實驗前將需要的水浴先預熱到70℃?zhèn)溆谩?br />
五.操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）
   提示：第一次使用前請先在漂洗液WB中加入指定量無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!
1.取5-50 ml尿液，放入適當大小離心管，3,000 rpm離心收集細胞沉淀。

2.小心棄上清，加入200μl緩沖液UB重懸細胞。

3.加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液，充分混勻，再加入200μl結合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，在70℃放置10分鐘。溶液應變清亮。

     
4.冷卻后加入100μl 異丙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀。
上述步驟中立刻渦旋或者吹打充分混勻非常重要，混勻不充分嚴重降低產(chǎn)量，必要時如樣品粘稠不易混勻時可以渦旋振蕩15秒混勻。

5.將上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。

6.加入500μl抑制物去除液IR，12,000 rpm 離心30秒，棄廢液。 

7.加入500μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。

8.加入500μl漂洗液WB，12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。

9.將吸附柱AC放回空收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。

10.取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加30μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預熱效果更好）， 室溫放置3-5分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000 rpm離心1分鐘。
洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當減少洗脫體積， 但最小體積不應少于15μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。

11.DNA可以存放在2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在－20℃。