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Super ibac P DNA 桿狀病毒DNA

包裝規(guī)格：

200816

Super ibac P DNA桿狀病毒DNA

5rnx

7000元

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

通過(guò)對(duì)桿狀病毒DNA的復(fù)制必需基因進(jìn)行修改，使其不能在昆蟲細(xì)胞中正常復(fù)制，只有和對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)移載體同源重組，修復(fù)其復(fù)制必需基因，才能在昆蟲細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制，只有當(dāng)Super ibac DNA和攜帶目的基因的轉(zhuǎn)移載體pIAT成功同源重組后，才能在昆蟲細(xì)胞中復(fù)制存活，因此共轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞后無(wú)需任何篩選，重組率為100%，一步法轉(zhuǎn)染，簡(jiǎn)單快速，尤其經(jīng)過(guò)基因改造后，重組蛋白更穩(wěn)定,蛋白生物活性更高。

Super ibac P DNA專門開發(fā)用于表達(dá)蛋白生產(chǎn)病毒顆粒（virus-like particle, VLP），也適用于胞質(zhì)蛋白的表達(dá)。該系統(tǒng)細(xì)胞在極晚期才裂解，因此可延長(zhǎng)重組蛋白細(xì)胞內(nèi)加工組裝成VLP的時(shí)間，從而提高VLP的產(chǎn)量。

運(yùn)輸及保存條件:

低溫運(yùn)輸，-20℃保存。

產(chǎn)品規(guī)格及組分：

組分名稱	規(guī)格
Super ibac P DNA	25ul
pIATGFP	25ul

使用方法：

共轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞生產(chǎn)重組桿狀病毒實(shí)驗(yàn)操作流程：

1. 接種細(xì)胞：將生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的sf9細(xì)胞計(jì)數(shù)，將1 x 10⁶ Sf9 細(xì)胞鋪均勻種于35mm平皿中，靜置至少1小時(shí)；

下一步操作之前觀察細(xì)胞確保細(xì)胞達(dá)到近匯合細(xì)胞單層。

2. 準(zhǔn)備共轉(zhuǎn)染質(zhì)粒：取0.1mL無(wú)血清無(wú)抗生素細(xì)胞培養(yǎng)基到1.5mL EP管中，加入100ng super iBac DNA （5uL）和500ng 轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pIAT（5uL），輕輕混勻。加入適量轉(zhuǎn)染試劑，如5uL Lipofectin，混勻，室溫靜置20分鐘，以形成脂質(zhì)體-DNA混合物。

3. 移去培養(yǎng)皿中1mL培養(yǎng)基，若細(xì)胞培養(yǎng)基中有血清，則用1mL無(wú)血清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩遍，最后加入1mL無(wú)血清培養(yǎng)基，注意，培養(yǎng)皿中留取1mL的培養(yǎng)基。

4. 立即將混勻的0.1mL DNA+脂質(zhì)體混合液，輕輕加入到細(xì)胞培養(yǎng)皿中間，28℃培養(yǎng)箱溫育5-24小時(shí)。

5. 取出培養(yǎng)皿加入1mL新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基（可以是10％血清培養(yǎng)基，也可根據(jù)需要加入抗生素），繼續(xù)28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)至5天。

6. 離心，收獲平皿中的培養(yǎng)液上清，放入無(wú)菌管中，作為重組病毒種子。重組病毒種子可以長(zhǎng)期保存于-80℃，也可短時(shí)間保存于4℃。

昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)BEVS介紹

昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)（Baculovirus Expression Vector System－BEVS）廣泛應(yīng)用于科研和工業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域。與其他常用的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)相比，昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)具有外源基因表達(dá)水平高、易于表達(dá)異源多聚體蛋白、安全性等優(yōu)勢(shì)，表達(dá)的重組蛋白通常具有正確的翻譯后修飾和生物學(xué)活性，如二硫鍵的形成、磷酸化、糖基化等等。同時(shí)昆蟲細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)，容易放大培養(yǎng)，有利于大規(guī)模表達(dá)重組蛋白。

Genenode君諾德公司，國(guó)內(nèi)獨(dú)家提供自產(chǎn)的第二代昆蟲桿狀病毒表達(dá)產(chǎn)品Super ibac，包括桿狀病毒DNA（Super ibac DNA），轉(zhuǎn)移載體(pIAT)，對(duì)照轉(zhuǎn)移載體(pIAT GFP)和Super ibac DNA Kit。相較于其他類似產(chǎn)品，我們價(jià)格更優(yōu)惠，供貨更迅速，同時(shí)還可以提供更快速、高效、經(jīng)濟(jì)的昆蟲桿狀病毒表達(dá)重組蛋白服務(wù)，自主研發(fā)生產(chǎn)的桿狀病毒表達(dá)試劑盒可以達(dá)到更高的重組蛋白表達(dá)水平，經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員能夠?yàn)槟扑]適合的服務(wù)，迅速解決在表達(dá)純化過(guò)程中遇到的問(wèn)題。

技術(shù)原理:

Super iBac系統(tǒng)是一個(gè)全新的生產(chǎn)重組桿狀病毒的技術(shù)平臺(tái)，免去了從親代病毒中篩選重組病毒的步驟，不需要進(jìn)行空斑實(shí)驗(yàn)，一步法桿狀病毒蛋白表達(dá)系統(tǒng)，是目前最領(lǐng)先的桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)。

通過(guò)對(duì)桿狀病毒DNA的復(fù)制必需基因進(jìn)行修改，使其不能在昆蟲細(xì)胞中正常復(fù)制，只有和對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)移載體同源重組，修復(fù)其復(fù)制必需基因，才能在昆蟲細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制，只有當(dāng)Super ibac DNA和攜帶目的基因的轉(zhuǎn)移載體pIAT成功同源重組后，才能在昆蟲細(xì)胞中復(fù)制存活，因此共轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞后無(wú)需任何篩選，重組率為100%，一步法轉(zhuǎn)染，簡(jiǎn)單快速，尤其經(jīng)過(guò)基因改造后，重組蛋白更穩(wěn)定,蛋白生物活性更高，適合分泌蛋白，膜蛋白，毒性蛋白等難表達(dá)的蛋白。

Super ibac昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)技術(shù)特點(diǎn):

1.重組蛋白表達(dá)水平高（最高可達(dá)細(xì)胞總蛋白的50%），大多數(shù)為有生物功能的可溶性蛋白；

2.真核表達(dá)系統(tǒng)，重組蛋白生物學(xué)活性高，能同時(shí)表達(dá)多個(gè)外源基因；

3.可進(jìn)行翻譯后修飾:磷酸化修飾, 形成正確折疊的二硫鍵, 進(jìn)行N-和O-型糖基化修飾

4.表達(dá)人源化蛋白，昆蟲細(xì)胞中糖基化途徑克服人源糖蛋白的問(wèn)題。

5.大多數(shù)昆蟲細(xì)胞系在不加血清培養(yǎng)基中快速生長(zhǎng)，得到高滴度病毒和高產(chǎn)量重組蛋白；

6.相對(duì)于其他真核表達(dá)系統(tǒng)成本較低，硬件設(shè)施成本低接近于原核表達(dá)，無(wú)需CO2培養(yǎng)箱，無(wú)需血清培養(yǎng)基；

7.規(guī)?；囵B(yǎng)簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)，適合自動(dòng)化生產(chǎn)，昆蟲細(xì)胞比哺乳動(dòng)物細(xì)胞操作簡(jiǎn)單；

8.商業(yè)化的BEVS系統(tǒng)讓病毒重組及蛋白表達(dá)變得更簡(jiǎn)單；

不同蛋白表達(dá)系統(tǒng)的比較：

	優(yōu)點(diǎn)	缺點(diǎn)
大腸桿菌	遺傳背景清楚、培養(yǎng)費(fèi)用低、耐受能力強(qiáng)、抗污染能力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、適用范圍廣	缺乏蛋白質(zhì)翻譯后加工機(jī)制; 目的蛋白常以包涵體形式釋放，產(chǎn)物純化困難，表達(dá)的蛋白生物活性低
哺乳動(dòng)物細(xì)胞	表達(dá)的蛋白能進(jìn)行翻譯后修飾并正確的折疊；能組成性或誘導(dǎo)性地表達(dá)目的蛋白；目的蛋白更接近天然狀態(tài)，適用于表達(dá)完整的大分子	表達(dá)量低、操作繁瑣、成本較高、不適合用于蛋白大規(guī)模生產(chǎn)
酵母細(xì)胞	生長(zhǎng)繁殖速度快，培養(yǎng)條件普通，可大規(guī)模生產(chǎn)，成本相對(duì)低能夠得到折疊及修飾后的蛋白質(zhì) 高水平表達(dá)蛋白質(zhì) 可克服異源蛋白降解	大多的重組蛋白表達(dá)效率較低、過(guò)度糖基化
昆蟲桿狀病毒	高效重組：重組率100% 能同時(shí)表達(dá)多個(gè)外源基因表達(dá)產(chǎn)量高，超過(guò)50%蛋白可被表達(dá) 可進(jìn)行翻譯后的各種修飾相比如其他表達(dá)系統(tǒng)，該系統(tǒng)成本低，硬件設(shè)施要求低，無(wú)需CO2培養(yǎng)箱，無(wú)需血清培養(yǎng)基培養(yǎng)簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)，適合自動(dòng)化生產(chǎn)

不同桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的比較

桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)介紹（BEVS）

第一代表達(dá)系統(tǒng): Bac-to-Bac	1.需要先在大腸桿菌系統(tǒng)中生產(chǎn)重組病毒, 篩選純化后再轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞; 2.重組效率非常低，大量篩選工作。
第一代表達(dá)系統(tǒng): BacPAK6/BaculoGold	1.將桿狀病毒DNA線性化, 引入多個(gè)Bsu361限制性酶切位點(diǎn); 2.Bsu361不能100%切割病毒DNA使之線性化, 重組病毒仍需要進(jìn)行空斑篩選。
第一代表達(dá)系統(tǒng): BaculoDirect	1.桿狀病毒DNA線性化； 2.需要利用更昔洛韋（核苷類似物）篩選重組病毒，對(duì)細(xì)胞有毒性； 3.重組效率低，需要好幾輪的擴(kuò)繁。
第二代表達(dá)系統(tǒng): iBac(Genenode)	1.高效重組：重組率100%,經(jīng)基因改造,僅重組病毒才能成活,無(wú)需加抗生素和任何篩選工作； 2.蛋白質(zhì)量高：經(jīng)基因改造,提高分泌蛋白效率，重組蛋白更穩(wěn)定,蛋白生物活性更高； 3.適用于難表達(dá)的蛋白：分泌蛋白，膜蛋白，毒性蛋白；

轉(zhuǎn)染GFP基因：

轉(zhuǎn)染GFP基因 Bac-Bac

桿狀病毒宿主細(xì)胞：

細(xì)胞系	來(lái)源	應(yīng)用	培養(yǎng)基
Sf-9	Spodopterafrugiperda Sf-9 (Pupal ovarian tissue)	重組桿狀病毒生產(chǎn) 胞內(nèi)蛋白表達(dá) 空斑分析	Sf-900II/III SFM HyQ SFX
Sf-21	Spodopterafrugiperda Sf-21 (Pupal ovarian tissue)	胞內(nèi)蛋白表達(dá) 重組分泌蛋白	Sf-900II/III SFM ESF-921 HyQ SFX
Hi-5	Trichoplusiani Hi-5 (Ovarian cells)	重組分泌蛋白	EX-CELL 405 Express Five SFM HyQ SFX
Tri-Ex	Sf-9 derivative	胞內(nèi)蛋白表達(dá)	TriEX

桿狀病毒DNA的選擇：

桿狀病毒DNA

特點(diǎn)

Super ibac S DNA

適合常規(guī)蛋白表達(dá)，尤其適合糖基化蛋白，分泌蛋白，膜蛋白，毒性蛋白等難表達(dá)的蛋白。

Super ibac P DNA

專門開發(fā)用于表達(dá)蛋白生產(chǎn)病毒顆粒（VLP），也適用于胞質(zhì)蛋白的表達(dá)。

產(chǎn)品線（具體請(qǐng)?jiān)儍r(jià)）：

貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	備注
202818	Super ibac S DNA Kit	5rnx	試劑盒(all-in-one kit)
200818	Super ibac S DNA	5rnx	桿狀病毒DNA
201801	pIAT1	3 ug	轉(zhuǎn)移載體
201802	pIAT2	3 ug	轉(zhuǎn)移載體
201803	pIAT GFP	3 ug	對(duì)照轉(zhuǎn)移載體
202816	Super ibac P DNA Kit	5rnx	試劑盒(all-in-one kit)
200816	Super ibac P DNA	5rnx	桿狀病毒DNA

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	優(yōu)點(diǎn)	缺點(diǎn)
大腸桿菌	遺傳背景清楚、培養(yǎng)費(fèi)用低、耐受能力強(qiáng)、抗污染能力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、適用范圍廣	缺乏蛋白質(zhì)翻譯后加工機(jī)制; 目的蛋白常以包涵體形式釋放，產(chǎn)物純化困難，表達(dá)的蛋白生物活性低
哺乳動(dòng)物細(xì)胞	表達(dá)的蛋白能進(jìn)行翻譯后修飾并正確的折疊；能組成性或誘導(dǎo)性地表達(dá)目的蛋白；目的蛋白更接近天然狀態(tài)，適用于表達(dá)完整的大分子	表達(dá)量低、操作繁瑣、成本較高、不適合用于蛋白大規(guī)模生產(chǎn)
酵母細(xì)胞	生長(zhǎng)繁殖速度快，培養(yǎng)條件普通，可大規(guī)模生產(chǎn)，成本相對(duì)低能夠得到折疊及修飾后的蛋白質(zhì) 高水平表達(dá)蛋白質(zhì) 可克服異源蛋白降解	大多的重組蛋白表達(dá)效率較低、過(guò)度糖基化
昆蟲桿狀病毒	高效重組：重組率100% 能同時(shí)表達(dá)多個(gè)外源基因表達(dá)產(chǎn)量高，超過(guò)50%蛋白可被表達(dá) 可進(jìn)行翻譯后的各種修飾相比如其他表達(dá)系統(tǒng)，該系統(tǒng)成本低，硬件設(shè)施要求低，無(wú)需CO2培養(yǎng)箱，無(wú)需血清培養(yǎng)基培養(yǎng)簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)，適合自動(dòng)化生產(chǎn)

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