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      Super ibac S DNA 桿狀病毒DNA

      Super ibac S DNA 桿狀病毒DNA/昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)/分泌蛋白/跨膜蛋白/毒性蛋白/完美替代Bac-to-Bac

      產(chǎn)品編號:200818

      產(chǎn)品規(guī)格:5rnx

      產(chǎn)品價格:7500

      包裝:

      儲存條件:-20℃

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      Super ibac S DNA 桿狀病毒DNA

      包裝規(guī)格:

      200818 Super ibac S DNA桿狀病毒DNA 5rnx 7500元


      產(chǎn)品簡介:

      通過對桿狀病毒DNA的復(fù)制必需基因進行修改,使其不能在昆蟲細胞中正常復(fù)制,只有和對應(yīng)的轉(zhuǎn)移載體同源重組,修復(fù)其復(fù)制必需基因,才能在昆蟲細胞中進行復(fù)制,只有當(dāng)Super ibac DNA和攜帶目的基因的轉(zhuǎn)移載體pIAT成功同源重組后,才能在昆蟲細胞中復(fù)制存活,因此共轉(zhuǎn)染昆蟲細胞后無需任何篩選,重組率為100%,一步法轉(zhuǎn)染,簡單快速,尤其經(jīng)過基因改造后,重組蛋白更穩(wěn)定,蛋白生物活性更高。

       

      Super ibac S DNA 系統(tǒng)刪除了影響分泌途徑效率的基因chiA和蛋白酶v-cath,提高重組蛋白的分泌效率并降低外源蛋白的降解,p10基因的刪除提高啟動子polh的活性,提高細胞的穩(wěn)定性,延長外源蛋白后加工的時間,提高polh啟動下的重組蛋白的翻譯效率及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌通路的效率,提高重組蛋白的產(chǎn)量和質(zhì)量。尤其適合分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白等難表達的蛋白。

       

      運輸及保存條件:

      低溫運輸,-20℃保存。

       

      產(chǎn)品規(guī)格及組分:

      組分名稱

      規(guī)格

      Super ibac S DNA

      25ul

      pIATGFP

      25ul

       

      使用方法:

      共轉(zhuǎn)染昆蟲細胞生產(chǎn)重組桿狀病毒實驗操作流程:
      1.   接種細胞:將生長對數(shù)期的sf9細胞計數(shù), 將1 x 106 Sf9 細胞均勻鋪種于35mm平皿中,靜置至少1小時使細胞貼壁;下一步操作之前觀察細胞確保細胞達到近匯合細胞單層。
       
      2.   準(zhǔn)備共轉(zhuǎn)染質(zhì)?!萌?.1mL無血清無抗生素細胞培養(yǎng)基到1.5mL EP管中,加入100ng super iBac DNA (5uL)和500ng 轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pIAT(5uL),輕輕混勻。加入適量轉(zhuǎn)染試劑,如5uL Lipofectin,混勻,室溫靜置20分鐘,以形成脂質(zhì)體-DNA混合物。
       
      3.   移去培養(yǎng)皿中1mL培養(yǎng)基,若細胞培養(yǎng)基中有血清,則用1mL無血清培養(yǎng)基洗滌細胞兩遍,最后加入1mL無血清培養(yǎng)基,注意,培養(yǎng)皿中留取1mL的培養(yǎng)基。
       
      4.   立即將混勻的0.1mL DNA+脂質(zhì)體混合液,輕輕加入到細胞培養(yǎng)皿中間,28℃培養(yǎng)箱溫育5-24小時。
       
      5.    續(xù)28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)至5天。
       
      6.    離心,收獲平皿中的培養(yǎng)液上清,放入無菌管中,作為重組病毒種子。重組病毒種子可以長期保存于-80℃,也可短時間保存于4℃。


      昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)BEVS介紹

           昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)(Baculovirus Expression Vector System-BEVS)  廣泛應(yīng)用于科研和工業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域。與其他常用的重組蛋白表達系統(tǒng)相比,昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)具有外源基因表達水平高、易于表達異源多聚體蛋白、安全性等優(yōu)勢,表達的重組蛋白通常具有正確的翻譯后修飾和生物學(xué)活性,如二硫鍵的形成、磷酸化、糖基化等等。同時昆蟲細胞懸浮生長,容易放大培養(yǎng),有利于大規(guī)模表達重組蛋白。

       

            Genenode君諾德公司,國內(nèi)獨家提供自產(chǎn)的第二代昆蟲桿狀病毒表達產(chǎn)品Super ibac,包括桿狀病毒DNA(Super ibac DNA),轉(zhuǎn)移載體(pIAT),對照轉(zhuǎn)移載體(pIAT GFP)和Super ibac DNA Kit。相較于其他類似產(chǎn)品,我們價格更優(yōu)惠,供貨更迅速,同時還可以提供更快速、高效、經(jīng)濟的昆蟲桿狀病毒表達重組蛋白服務(wù),自主研發(fā)生產(chǎn)的桿狀病毒表達試劑盒可以達到更高的重組蛋白表達水平,經(jīng)驗豐富的技術(shù)人員能夠為您推薦最適合的服務(wù),迅速解決在表達純化過程中遇到的問題。

      技術(shù)原理:

      Super iBac系統(tǒng)是一個全新的生產(chǎn)重組桿狀病毒的技術(shù)平臺,免去了從親代病毒中篩選重組病毒的步驟,不需要進行空斑實驗,一步法桿狀病毒蛋白表達系統(tǒng),是目前最領(lǐng)先的桿狀病毒表達系統(tǒng)。

       

      通過對桿狀病毒DNA的復(fù)制必需基因進行修改,使其不能在昆蟲細胞中正常復(fù)制,只有和對應(yīng)的轉(zhuǎn)移載體同源重組,修復(fù)其復(fù)制必需基因,才能在昆蟲細胞中進行復(fù)制,只有當(dāng)Super ibac DNA和攜帶目的基因的轉(zhuǎn)移載體pIAT成功同源重組后,才能在昆蟲細胞中復(fù)制存活,因此共轉(zhuǎn)染昆蟲細胞后無需任何篩選,重組率為100%,一步法轉(zhuǎn)染,簡單快速,尤其經(jīng)過基因改造后,重組蛋白更穩(wěn)定,蛋白生物活性更高,適合分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白等難表達的蛋白。

       

      Super ibac昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)技術(shù)特點:

      1.重組蛋白表達水平高(最高可達細胞總蛋白的50%),大多數(shù)為有生物功能的可溶性蛋白;

      2.真核表達系統(tǒng),重組蛋白生物學(xué)活性高,能同時表達多個外源基因;

      3.可進行翻譯后修飾:磷酸化修飾, 形成正確折疊的二硫鍵, 進行N-和O-型糖基化修飾

      4.表達人源化蛋白,昆蟲細胞中糖基化途徑克服人源糖蛋白的問題。

      5.大多數(shù)昆蟲細胞系在不加血清培養(yǎng)基中快速生長,得到高滴度病毒和高產(chǎn)量重組蛋白;

      6.相對于其他真核表達系統(tǒng)成本較低,硬件設(shè)施成本低接近于原核表達,無需CO2培養(yǎng)箱,無需血清培養(yǎng)基;

      7.規(guī)?;囵B(yǎng)簡單經(jīng)濟,適合自動化生產(chǎn),昆蟲細胞比哺乳動物細胞操作簡單;

      8.商業(yè)化的BEVS系統(tǒng)讓病毒重組及蛋白表達變得更簡單;

       

      不同蛋白表達系統(tǒng)的比較:

       

      優(yōu)點

      缺點

      大腸桿菌

            遺傳背景清楚、培養(yǎng)費用低、耐受能力強、抗污染
            能力強、穩(wěn)定   性好、適用范圍廣

           缺乏蛋白質(zhì)翻譯后加工機制;

           目的蛋白常以包涵體形式釋放,產(chǎn)物純化
           困難,表達的蛋白生物活性低

      哺乳動物細胞

           表達的蛋白能進行翻譯后修飾并正確的折疊;
           能組成性或誘導(dǎo)性地表達目的蛋白;
           目的蛋白更接近天然狀態(tài),適用于表達完整的大分子

          表達量低、操作繁瑣、成本較高、
          不適合用于蛋白大規(guī)模生產(chǎn)

      酵母細胞

           生長繁殖速度快,培養(yǎng)條件普通,可大規(guī)模生產(chǎn),
           成本相對低

           能夠得到折疊及修飾后的蛋白質(zhì)

           高水平表達蛋白質(zhì)

           可克服異源蛋白降解

               大多的重組蛋白表達效率較低、
               過度糖基化

      昆蟲桿狀病毒

           高效重組:重組率100%

           能同時表達多個外源基因

           表達產(chǎn)量高,超過50%蛋白可被表達

           可進行翻譯后的各種修飾

          相比如其他表達系統(tǒng),該系統(tǒng)成本低,硬件設(shè)施要求低,     無需CO2培養(yǎng)箱,無需血清培養(yǎng)基

          培養(yǎng)簡單經(jīng)濟,適合自動化生產(chǎn)

       



        

                                                                          不同桿狀病毒表達系統(tǒng)的比較


      桿狀病毒表達系統(tǒng)介紹(BEVS)

      第一代表達系統(tǒng):

      Bac-to-Bac

      1.需要先在大腸桿菌系統(tǒng)中生產(chǎn)重組病毒, 篩選純化后再轉(zhuǎn)染昆蟲細胞;

      2.重組效率非常低,大量篩選工作。

      第一代表達系統(tǒng):

      BacPAK6/BaculoGold

      1.將桿狀病毒DNA線性化, 引入多個Bsu361限制性酶切位點;

      2.Bsu361不能100%切割病毒DNA使之線性化, 重組病毒仍需要進行空斑篩選。

      第一代表達系統(tǒng):

      BaculoDirect

      1.桿狀病毒DNA線性化;

      2.需要利用更昔洛韋(核苷類似物)篩選重組病毒,對細胞有毒性;

      3.重組效率低,需要好幾輪的擴繁。

      第二代表達系統(tǒng):

      iBac(Genenode)

      1.高效重組:重組率100%,經(jīng)基因改造,僅重組病毒才能成活,無需加抗生素和任何篩選工作;

      2.蛋白質(zhì)量高:經(jīng)基因改造,提高分泌蛋白效率,重組蛋白更穩(wěn)定,蛋白生物活性更高;

      3.適用于難表達的蛋白:分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白;

       

      轉(zhuǎn)染GFP基因:

      轉(zhuǎn)染GFP基因 Bac-Bac 

      桿狀病毒宿主細胞:

      細胞系

      來源

      應(yīng)用

      培養(yǎng)基

      Sf-9

      Spodopterafrugiperda

      Sf-9 (Pupal ovarian tissue)

      重組桿狀病毒生產(chǎn)

      胞內(nèi)蛋白表達

      空斑分析

      Sf-900II/III SFM

      HyQ SFX

      Sf-21

      Spodopterafrugiperda

      Sf-21 (Pupal ovarian tissue)

      胞內(nèi)蛋白表達

      重組分泌蛋白

      Sf-900II/III SFM

      ESF-921

      HyQ SFX

      Hi-5

      Trichoplusiani

      Hi-5 (Ovarian cells)

      重組分泌蛋白

      EX-CELL 405

      Express Five SFM

      HyQ SFX

      Tri-Ex

      Sf-9 derivative

      胞內(nèi)蛋白表達

      TriEX

       

      桿狀病毒DNA的選擇:

      桿狀病毒DNA

      特點

      Super ibac S DNA

      適合常規(guī)蛋白表達,尤其適合糖基化蛋白,分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白等難表達的蛋白。

      Super ibac P DNA

      專門開發(fā)用于表達蛋白生產(chǎn)病毒顆粒(VLP),也適用于胞質(zhì)蛋白的表達。

       

      產(chǎn)品線(具體請詢價):

      貨號

      產(chǎn)品名稱

      產(chǎn)品規(guī)格

      備注

      202818

      Super ibac S DNA Kit

      5rnx

      試劑盒(all-in-one kit)

      200818

      Super ibac S DNA

      5rnx

      桿狀病毒DNA

      201801

      pIAT1

      3 ug

      轉(zhuǎn)移載體

      201802

      pIAT2

      3 ug

      轉(zhuǎn)移載體

      201803

      pIAT GFP

      3 ug

      對照轉(zhuǎn)移載體

      202816

      Super ibac P DNA Kit

      5rnx

      試劑盒(all-in-one kit)

      200816  

      Super ibac P DNA

      5rnx

      桿狀病毒DNA

        



      桿狀病毒DNA的選擇:

      桿狀病毒DNA

      特點

      Super ibac S DNA

      適合常規(guī)蛋白表達,尤其適合糖基化蛋白,分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白等難表達的蛋白。

      Super ibac P DNA

      專門開發(fā)用于表達蛋白生產(chǎn)病毒顆粒(VLP),也適用于胞質(zhì)蛋白的表達。

       

      產(chǎn)品線(具體請詢價):

      貨號

      產(chǎn)品名稱

      產(chǎn)品規(guī)格

      備注

      202818

      Super ibac S DNA Kit

      5rnx

      試劑盒(all-in-one kit)

      200818

      Super ibac S DNA

      5rnx

      桿狀病毒DNA

      201801

      pIAT1

      3 ug

      轉(zhuǎn)移載體

      201802

      pIAT2

      3 ug

      轉(zhuǎn)移載體

      201803

      pIAT GFP

      5rnx

      對照轉(zhuǎn)移載體

      202816

      Super ibac P DNA Kit

      5rnx

      試劑盒(all-in-one kit)

      200816

      Super ibac P DNA

      5rnx

      桿狀病毒DNA


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