產(chǎn)品中心

超純總RNA提取試劑盒(離心柱型)

UltraPure Total RNA Extraction Kit(Column)

包裝規(guī)格：

本產(chǎn)品僅用于科研，禁止用于醫(yī)藥、臨床醫(yī)療、食品和化妝品等用途。

產(chǎn)品介紹：
超純總RNA提取試劑盒，適用于各種動植物組織及細(xì)胞的總RNA提取。裂解液RL可以高效裂解組織細(xì)胞，滅活RNA酶；結(jié)合多次柱漂洗的方式，可以提取無蛋白、基因組、細(xì)胞代謝物等雜質(zhì)污染的高純度、高質(zhì)量的總RNA。

可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A篩選、體外翻譯、構(gòu)建cDNA文庫等各種分子生物學(xué)實驗。

產(chǎn)品特點：
無污染：整套試劑盒采用RNase-Free處理。
適用廣：適用于動物組織，植物組織，各種微生物和培養(yǎng)細(xì)胞等各類樣品材料的RNA提取。
易操作：操作簡便，提取過程僅需 30 分鐘左右。 
吸附柱：含有特異性吸附柱。通過漂洗－離心－洗脫的步驟提取。
高質(zhì)量：有效保證RNA的完整性，回收RNA 效率高，純度高，沒有蛋白和其他雜質(zhì)污染。OD260/OD280的比值可達1.9~2.2，可用于各種分子生物學(xué)實驗。

操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項） 
樣品處理：
1.動物組織：取新鮮或－80°C凍存動物組織盡量剪碎，每30 ~ 100mg組織加入1ml 裂解液RL，勻漿儀進行勻漿處理。或在液氮中研磨后加入1ml裂解液RL混勻。注意：樣品體積一般不超過裂解液RL體積的10%。
2.植物組織：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或?qū)⒅参锝M織剪碎后直接在裂解液RL中迅速研磨，每50 ~ 100mg組織加入1ml 裂解液RL混勻。注意：樣品體積一般不超過裂解液RL體積的10%。
3.貼壁細(xì)胞：直接在培養(yǎng)板中加入裂解液RL裂解細(xì)胞，按培養(yǎng)板面積每10cm²加1ml裂解液 RL，用移液器反復(fù)吹打，直到看不到明顯的細(xì)胞團為止。裂解液加入量不足會有DNA污染。
4.懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞。每5~10×10⁶動物、植物和酵母細(xì)胞或每1×10⁷細(xì)菌細(xì)胞加1ml裂解液混勻。用移液器 反復(fù)吹打，直到看不到明顯的細(xì)胞團為止。不需要洗滌，避免mRNA降解。
5.若提取細(xì)菌RNA，推薦SpinPure?細(xì)菌RNA快速提取試劑盒(離心柱型)（目錄號：2120）；若提取血液RNA，推薦TRI LS Reagent液體樣品總RNA抽提試劑(TRIzol LS Reagent)（目錄號：2107）。

提取步驟：
1.將處理后的樣品在室溫靜置5~10分鐘，使得核酸蛋白復(fù)合物完全分離。
2.可選步驟：在4°C 12,000rpm 離心10分鐘，取上清轉(zhuǎn)入一個新的RNase free的離心管中。（當(dāng)樣品富含蛋白質(zhì)、脂肪、多糖或是細(xì)胞外物質(zhì)例如肌肉、脂肪組織或植物的塊莖部分時可能需要額外的分離步驟。）
3.每1ml 裂解液RL加200μl氯仿。蓋緊樣品管蓋，劇烈振蕩15秒并將其在室溫下靜置3分鐘。
4.4°C 12,000rpm 離心10分鐘，樣品會分成三層：下層有機相，中間層和上清水相層，RNA存在于上清水相層中。
5.將上清水相轉(zhuǎn)入新的離心管中，加入0.5倍上清水相體積的無水乙醇，立即吹打混勻。（不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能會黏附在槍頭的外壁，注意不能將其帶入離心管中。）
6.將混合溶液（每次小于700μl，）轉(zhuǎn)入套有吸附柱AC的離心管中，12,000rpm 離心45秒，棄掉廢液。
7.加500μl去蛋白液RE，12,000 rpm離心45秒，棄掉廢液。
8.加500μl漂洗液RW（請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm 離心45秒，棄掉廢液。
9.重復(fù)步驟8一次。
10.將吸附柱RA放回收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
11.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液），放入新的RNase-free離心管中，在吸附膜的中間部位加50 ~ 80μl RNase-free H2O，室溫靜置2分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。洗脫后的RNA可立即使用或保存在－80°C。

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