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新鮮全血細(xì)胞總RNA提取試劑盒(離心柱型)

Fresh Blood Cell Total RNA Extraction Kit(Column)

包裝規(guī)格：

本產(chǎn)品僅用于科研，禁止用于醫(yī)藥、臨床醫(yī)療、食品和化妝品等用途。

產(chǎn)品介紹：
超純?nèi)俁NA提取試劑盒，適用于血液RNA提取。優(yōu)先去除紅細(xì)胞，避免過多的雜質(zhì)污染，再進(jìn)行裂解；結(jié)合特異性的吸附柱，即可提取無蛋白、基因組、細(xì)胞代謝物等雜質(zhì)污染的高純度、高質(zhì)量的總RNA。

可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A篩選、體外翻譯、構(gòu)建cDNA文庫(kù)等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
無污染：整套試劑盒采用RNase-Free處理。 
特殊性：適用于提取血液樣品的總RNA。
易操作：操作簡(jiǎn)便，提取過程僅需 30 分鐘左右。 
吸附柱：含有特異性吸附柱。通過漂洗－離心－洗脫的步驟提取。
高質(zhì)量：有效保證RNA的完整性，回收RNA 效率高，純度高，沒有蛋白和其他雜質(zhì)污染。OD260/OD280的比值可達(dá)1.9~2.2，可用于各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)） 
1.在適合大小的RNase free離心管中加入1倍體積（ 0.5~1.0ml）含有抗凝劑的新鮮血液樣本和3倍體積的紅細(xì)胞裂解液RLB顛倒混勻。
2.室溫放置10分鐘（期間應(yīng)該顛倒輕彈混勻數(shù)次幫助裂解紅細(xì)胞）。如果RNA降解嚴(yán)重，可在冰上裂解，但要適當(dāng)延長(zhǎng)裂解時(shí)間。
3.12,000 rpm離心20秒，倒棄紅色上清，留下完整的管底白細(xì)胞團(tuán)，小心的盡可能多的吸棄上清（注意不要吸到管底的細(xì)胞團(tuán)）。如果看到的是大部分的紅色細(xì)胞團(tuán)，說明紅細(xì)胞裂解很不充分，應(yīng)該再加入紅細(xì)胞裂解液RLB重懸細(xì)胞團(tuán)后重復(fù)步驟2，3。
4.加入1ml的裂解液RL，渦旋震蕩，重懸混勻，在室溫條件下靜置5分鐘以使核蛋白體完全分解。
5.每1ml裂解液RL加200μl氯仿。蓋緊管蓋，劇烈振蕩15秒并室溫下放置2分鐘。
6.在4°C 12,000rpm 離心10分鐘，樣品會(huì)分成三層：下層有機(jī)相，中間層和上清水相，RNA存在于上清水相中。把上清水相轉(zhuǎn)移到新管中（不要觸碰中間層）。
7.加入上清水相等體積的70%乙醇（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），可能會(huì)出現(xiàn)沉淀，立即吹打混勻。將混合溶液轉(zhuǎn)入套有收集管的吸附柱RA中。12，000rpm 離心45秒，棄掉廢液。
8.加500μl 去蛋白液RE，12，000rpm 離心45秒，棄掉廢液。
9.加入500μl漂洗液RW（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm 離心45秒，棄掉廢液。
10.重復(fù)步驟9一次。
11.將吸附柱RA放回收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
12.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液），放入新的RNase - free離心管中，在吸附膜的中間部位加30 ~ 50μl RNase - free H2O室溫靜置1分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。取得RNA后，將RNA溶液保存在－80°C，防止降解。