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TRI全血(液體樣本)總RNA提取試劑盒(離心柱型)

TRI Blood/Liquid Sample Total RNA Extraction Kit(Column)

包裝規(guī)格：

本產(chǎn)品僅用于科研，禁止用于醫(yī)藥、臨床醫(yī)療、食品和化妝品等用途。

產(chǎn)品介紹：
TRI全血(液體樣本)總RNA提取試劑盒，適用于各種液體樣本的RNA提取。裂解液RLS可以高效裂解液體中的細(xì)胞，滅活RNA酶；結(jié)合特異性的吸附柱，即可提取無蛋白、基因組、細(xì)胞代謝物等雜質(zhì)污染的高純度、高質(zhì)量的總RNA。

可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A篩選、體外翻譯、構(gòu)建cDNA文庫(kù)等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
無污染：整套試劑盒采用RNase-Free處理。 
特殊性：適用于提取血液樣品等液體樣品總RNA。
易操作：操作簡(jiǎn)便，提取過程僅需 30 分鐘左右。 
吸附柱：含有特異性吸附柱。通過漂洗－離心－洗脫的步驟提取。
高質(zhì)量：有效保證RNA的完整性，回收RNA 效率高，純度高，沒有蛋白和其他雜質(zhì)污染。OD260/OD280的比值可達(dá)1.9~2.2，可用于各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)） 
樣品處理：
1.液體樣品：每250μl液體樣品（血清，血漿，腦脊液等等）加入750μl 裂解液RLS，用移液器吹打混勻樣品，裂解樣品中細(xì)胞。每5~10×10⁶ 個(gè)細(xì)胞至少加入750μl 裂解液RLS。確保裂解液RLS和樣品的體積比總是3：1。
2.貼壁細(xì)胞：直接在培養(yǎng)板中加入裂解液裂解細(xì)胞，按培養(yǎng)板面積每10cm²加入300~400μl裂解液RLS，用取樣器吹打混勻。用移液器反復(fù)吹打，直到看不到明顯的細(xì)胞團(tuán)為止。裂解液加入量不足會(huì)有DNA污染。
3.懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞。每5~10×106動(dòng)物、植物和酵母細(xì)胞或每1×107細(xì)菌細(xì)胞加入750μl裂解液RLS混勻。如果懸浮細(xì)胞液的體積小于250μl，加入滅菌水將組織樣品體積調(diào)整到250μl。確保裂解液RLS和樣品的體積比總是3：1。用移液器反復(fù)吹打，直到看不到明顯的細(xì)胞團(tuán)為止。不需要洗滌，避免mRNA降解。

提取步驟：
1.將勻漿樣品劇烈震蕩后，室溫靜置5分鐘以使核蛋白體完全解離。
2.每750μl 裂解液RLS加200μl氯仿。劇烈震蕩15秒并將其在室溫下靜置3分鐘。
3.4°C 12,000rpm 離心10分鐘，樣品會(huì)分成三層：下層有機(jī)相，中間層和上清水相，RNA存在于上清水相中。把上清水相轉(zhuǎn)移到新管中（不要觸碰中間層）。
4.加入上清水相等體積的70%乙醇（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），可能會(huì)出現(xiàn)沉淀，立即吹打混勻。將混合溶液轉(zhuǎn)入套有收集管的吸附柱RA中。12,000rpm 離心45秒，棄廢液。
5.加500μl 去蛋白液RE，12,000rpm 離心45秒，棄廢液。
6.加入500μl漂洗液RW（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm 離心45秒，棄掉廢液。
7.重復(fù)步驟6一次。
8.將吸附柱RA放回空收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
9.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液），放入新的RNase - free離心管中，在吸附膜的中間部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O室溫靜置1分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。取得RNA后，將RNA溶液保存在－80°C，防止降解。

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