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組織/細(xì)胞RNA提取試劑盒(離心柱型,gDNA Eraser)

Tissue/Cell RNA Extraction Kit with gDNA Eraser(Column)

包裝規(guī)格：

產(chǎn)品介紹：
組織細(xì)胞RNA提取試劑盒，可快速提取動(dòng)物細(xì)胞和易裂解動(dòng)物組織總RNA?？稍?0分鐘內(nèi)，無需使用苯酚、氯仿等有機(jī)試劑，采用獨(dú)特的裂解液可以迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶，含有獨(dú)特的基因組DNA清除柱，結(jié)合多次柱漂洗的方式，可提取沒有蛋白、細(xì)胞代謝物、基因組等雜質(zhì)污染的高純度、高質(zhì)量的總RNA。

可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A篩選、體外翻譯、構(gòu)建cDNA文庫(kù)等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
無污染：整套試劑盒采用RNase-Free處理。
特殊性：適用于提取動(dòng)物組織和培養(yǎng)細(xì)胞總RNA。
易操作：操作簡(jiǎn)便，提取過程僅需 30 分鐘左右。 
安全性：無需使用苯酚、氯仿等有機(jī)試劑。
吸附柱：含有特異性吸附柱。通過漂洗－離心－洗脫的步驟提取。
高質(zhì)量：有效保證RNA的完整性，回收RNA 效率高，純度高，沒有蛋白和其他雜質(zhì)污染。OD260/OD280的比值可達(dá)1.9~2.2，可用于各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)） 
樣品處理：
1.動(dòng)物組織：取新鮮或－80°C凍存動(dòng)物組織盡量剪碎，加入350μl（< 20mg組織）或600μl （20 ~ 30mg組織）的裂解液RLT Plus，勻漿儀進(jìn)行勻漿處理?；蛟谝旱醒心ズ蠹尤牒线m裂解液RLT Plus混勻。
2.貼壁細(xì)胞：直接在培養(yǎng)板中加入裂解液RLT Plus裂解細(xì)胞，按培養(yǎng)板面積每10cm²加1ml裂解液RLT Plus，用取樣器吹打混勻。用移液器反復(fù)吹打 ，直到看不到明顯的細(xì)胞團(tuán)為止。裂解液加入量不足會(huì)有DNA污染。
3.懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞。加入350μl裂解液RLT Plus（<5×10⁶細(xì)胞）或者600μl裂解液RLT Plus（5×106 ~ 1×10⁷細(xì)胞）。 用移液器反復(fù)吹打，直到看不到明顯的細(xì)胞團(tuán)為止。不需要洗滌，避免mRNA降解。

提取步驟：
1.將處理后的樣品在室溫靜置5~10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，會(huì)有雜質(zhì)沉淀。
2.將上清液轉(zhuǎn)入套有基因組DNA清除柱的離心管中。不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能會(huì)黏附在槍頭的外壁，注意不能將其帶入離心管中。）
3.13,000 rpm離心60秒，保留濾過液（RNA在濾過液中）。
4.估計(jì)濾過液體積，加入等體積的70%乙醇（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇）立即吹打混勻。
5.將混合溶液（每次小于700μl）滴入套有吸附柱RA的離心管中，13,000 rpm離心30秒，棄掉廢液。
6.加700μl 去蛋白液RW1，室溫放置1分鐘，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。
7.加500μl漂洗液RW（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。
8.重復(fù)步驟7一次。
9.將吸附柱RA放回收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
10.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液），放入新的RNase-free離心管中，在吸附膜的中間部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O室溫放置1分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。洗脫后的RNA可立即使用或保存在－80°C。

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