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組織/細(xì)胞RNA/DNA/Protein分離提取試劑盒(離心柱型)

Tissue/Cell RNA/DNA/Protein Extraction Kit(Column)

包裝規(guī)格：

本產(chǎn)品僅用于科研，禁止用于醫(yī)藥、臨床醫(yī)療、食品和化妝品等用途。

產(chǎn)品介紹：
組織細(xì)胞RNA/DNA/Protein分離提取試劑盒，可快速?gòu)耐粋€(gè)動(dòng)物細(xì)胞或者組織樣品中同時(shí)提取DNA、RNA和Protein。無(wú)需苯酚、氯仿等有機(jī)試劑。用獨(dú)特的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA/DNA酶，通過(guò)基因組DNA吸附柱時(shí)，DNA會(huì)吸附在吸附柱內(nèi)，而RNA和Protein會(huì)濾過(guò)，通過(guò)后續(xù)的多次柱漂洗的方式。可在60分鐘左右，同時(shí)提取純度高，沒(méi)有雜質(zhì)污染，互不干擾的DNA、RNA和Protein。

得到的RNA產(chǎn)物可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A篩選、體外翻譯、構(gòu)建cDNA文庫(kù)等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。基因組DNA也可用于下游的Southern、酶切、PCR等各種試驗(yàn)。Protein可用于SDS-PAGE電泳或者western blot 等試驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
無(wú)污染：整套試劑盒采用RNase-Free處理。
特殊性：適用于動(dòng)物組織和培養(yǎng)細(xì)胞，可同時(shí)提取互不干擾的總RNA和基因組DNA。
易操作：操作簡(jiǎn)便，提取過(guò)程僅需 60分鐘左右。 
安全性：無(wú)需使用苯酚、氯仿等有機(jī)試劑。
吸附柱：含有特異性吸附柱。通過(guò)漂洗－離心－洗脫的步驟提取。
高質(zhì)量：有效保證RNA/DNA/Protein的完整性，回收RNA /DNA/Protein效率高，純度高，沒(méi)有蛋白和其他雜質(zhì)污染。可用于各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)） 
洗脫緩沖液EB在65°C~70°C水浴鍋中預(yù)熱，效果更佳。

樣品處理：
1.動(dòng)物組織：取新鮮或－80°C凍存動(dòng)物組織盡量剪碎，加入350μl（< 20mg組織）或600μl （20 ~ 30mg組織）的裂解液RLT，勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。或在液氮中研磨成細(xì)粉后，取研磨組織細(xì)粉(20mg/30mg)轉(zhuǎn)入裝有350μl/600μl組織裂解液RLT的1.5ml離心管中，劇烈振蕩混勻或者200μl吸頭吹打混勻。
2.貼壁細(xì)胞：直接在培養(yǎng)板中加入裂解液RLT裂解細(xì)胞，按培養(yǎng)板面積每10cm2加1ml裂解液RLT，用取樣器吹打混勻。用移液器反復(fù)吹打， 直到看不到明顯的細(xì)胞團(tuán)為止。裂解液加入量不足會(huì)有DNA污染。
3.懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞。加入350μl裂解液RLT（<5×106細(xì)胞）或者600μl裂解液RLT（5×106 ~ 1×107細(xì)胞）。 用移液器反復(fù)吹打，直到看不到明顯的細(xì)胞團(tuán)為止。不需要洗滌，避免mRNA降解。

提取步驟：
1.將處理后的樣品在室溫靜置5~10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，會(huì)有雜質(zhì)沉淀。
2.將上清液轉(zhuǎn)入套有基因組DNA吸附柱DA的離心管中。（不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能會(huì)黏附在槍頭的外壁，注意不能將其帶入離心管中。）
3.13,000 rpm離心60秒，保留濾過(guò)液（RNA和Protein在過(guò)濾液中）、吸附柱DA（DNA在吸附柱中）。
（此時(shí)將分開(kāi)實(shí)驗(yàn)，建議先提取RNA，吸附柱DA短時(shí)間可存放4°C度備用。Protein提取從RNA提取步驟5中分離。）

提取RNA步驟：
4.估計(jì)濾過(guò)液體積，加入等體積的70%乙醇（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），立即吹打混勻。
5.將混合溶液（每次小于700μl）滴入套有吸附柱RA的離心管中，13,000 rpm離心30秒。（保留濾過(guò)液以備提取Protein）
6.將吸附柱RA套入新的離心管中，加700μl 去蛋白液RW1，室溫靜置1分鐘，12，000rpm 離心30秒，棄掉廢液。
7.加入500μl漂洗液RW（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。
8.重復(fù)步驟7一次。
9.將吸附柱RA放回收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)，棄掉廢管。
10.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液），放入新的RNase - free離心管中，在吸附膜的中間部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O室溫靜置1分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。洗脫后的RNA可立即使用或保存在－80°C,防止降解。

提取DNA步驟：
11.在步驟3的吸附柱DA上加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。
12.加入700μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。
13.加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。
14.將DNA吸附柱DA放入收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
15.取出DA吸附柱（避免吸附柱DA的底部碰到收集管里面的廢液），放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB， 室溫靜置3 ~ 5分鐘，12,000rpm 離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱 中，室溫靜置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。洗脫后的DNA可立即使用或保存在－20°C，防止降解。

提取Protein步驟：
16.將步驟5的濾過(guò)液中加入濾過(guò)液等體積的緩沖液APP，渦旋振蕩混勻，室溫靜置15分鐘沉淀Protein。
17.13,000rpm離心5~10分鐘，小心棄上清。加入500μl 70%乙醇（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），顛倒后離心1分鐘，留下蛋白沉淀，盡量將上清液體用移液器吸干凈。
18.室溫晾干沉淀5~10分鐘，讓乙醇揮發(fā)干凈，以免下影響游試驗(yàn)。
19.將蛋白沉淀溶解于30~150μl 1×蛋白上樣緩沖液或其它下游試驗(yàn)要求的緩沖液。
20.95°C放置5分鐘溶解和變性蛋白，回復(fù)到室溫，最高速離心1分鐘。