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細(xì)菌RNA提取試劑盒(離心柱型,gDNA Eraser)

Bacteria RNA Extraction Kit with gDNA Eraser(Column)

包裝規(guī)格：

本產(chǎn)品僅用于科研，禁止用于醫(yī)藥、臨床醫(yī)療、食品和化妝品等用途。

產(chǎn)品介紹：
細(xì)菌RNA提取試劑盒(離心柱型,gDNA Eraser)，適用于快速提取細(xì)菌總RNA?？稍?0分鐘左右，無需苯酚、氯仿等有機(jī)試劑提取總RNA。結(jié)合高效的gDNA過濾技術(shù)，可高效去除基因組DNA，純化得到的RNA幾乎不含DNA污染，采用多次柱漂洗的方式，可提取沒有蛋白、細(xì)胞代謝物等雜質(zhì)污染的高純度、高質(zhì)量的總RNA。 

可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A篩選、體外翻譯、構(gòu)建cDNA文庫等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
無污染：整套試劑盒采用RNase-Free處理。
特殊性：適用于提取細(xì)菌的總RNA。
易操作：操作簡便，提取過程僅需 30 分鐘左右。 
安全性：無需使用苯酚、氯仿等有機(jī)試劑。
吸附柱：含有特異性吸附柱。通過漂洗－離心－洗脫的步驟提取。
高質(zhì)量：有效保證RNA的完整性，回收RNA 效率高，純度高，沒有蛋白和其他雜質(zhì)污染。OD260/OD280的比值可達(dá)1.9~2.2，可用于各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請先閱讀注意事項(xiàng)）
樣品處理：
1.離心收集1ml菌液（約108~109細(xì)胞）到一個1.5ml離心管，去除上清，殘留的上清不能超過20μl。
2.根據(jù)細(xì)胞的種類和數(shù)量，充分重懸細(xì)胞加入100μl TE（需先加入溶菌酶，終濃度為1mg/ml）。
3.室溫條件下靜置5分鐘。每2分鐘渦旋振蕩10秒幫助破壁。
根據(jù)不同細(xì)菌類型和破壁難易程度，選擇合適的溶菌酶、工作濃度和溫育溫度、時間等，還可以使用玻璃珠擊打、機(jī)械破壁、蛋白酶K消化等方法幫助破壁。

提取步驟：
1.短暫離心收集細(xì)胞到管底，棄掉上清。渦旋振蕩重懸分散細(xì)胞。
2.加入500μl裂解液RLT Plus，吹打混勻后劇烈振蕩20秒。
3.如果有明顯的團(tuán)塊或者不溶物可以將裂解物13，000rpm離心3分鐘， 將裂解物上清全部轉(zhuǎn)到一個新離心管再進(jìn)行下一步。
4.轉(zhuǎn)入套有基因組DNA清除柱DA的離心管，13,000 rpm離心60秒，保留濾過液（RNA在濾過液中）。
5.在濾液中加入等體積的70%乙醇（請先檢查是否已加入無水乙醇），立即吹打混勻。
6.將混合溶液（每次小于700μl，可分兩次加入）轉(zhuǎn)入套有吸附柱RA的離心管中，13,000 rpm離心60秒，棄掉廢液。
7.加入700μl 去蛋白液RW1，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。
8.加入500μl漂洗液RW（請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。
9.重復(fù)步驟8一次。
10.將吸附柱RA放回空收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
11.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液），放入新的RNase-free離心管中，在吸附膜的中間部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O，室溫靜置1分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘，取得RNA后，將RNA溶液保存在－80°C，防止降解。

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