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酵母RNA提取試劑盒(離心柱型,含Lytic Enzyme)

Yeast RNA Extraction Kit with Lytic Enzyme(Column)

包裝規(guī)格：

本產(chǎn)品僅用于科研，禁止用于醫(yī)藥、臨床醫(yī)療、食品和化妝品等用途。

產(chǎn)品介紹：
酵母RNA提取試劑盒，適用于提取酵母細(xì)胞的總RNA。含有Lytic Enzyme包含20多種酶，可以溶解各種酵母細(xì)胞的細(xì)胞壁，經(jīng)過獨(dú)特的裂解液裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶，結(jié)合多次柱漂洗的方式，在20分鐘左右，即可提取沒有蛋白、細(xì)胞代謝物等雜質(zhì)污染的高純度、高質(zhì)量的總RNA。

可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A篩選、體外翻譯、構(gòu)建cDNA文庫等各種分子生物學(xué)實(shí)驗。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
無污染：整套試劑盒采用RNase-Free處理。
特殊性：適用于提取酵母的總RNA。
易操作：操作簡便，提取過程僅需 20 分鐘左右。 
安全性：無需使用苯酚、氯仿等有機(jī)試劑。
吸附柱：含有特異性吸附柱。通過漂洗－離心－洗脫的步驟提取。
高質(zhì)量：有效保證RNA的完整性，回收RNA 效率高，純度高，沒有蛋白和其他雜質(zhì)污染。OD260/OD280的比值可達(dá)1.9~2.2，可用于各種分子生物學(xué)實(shí)驗。

操作步驟：（實(shí)驗前請先閱讀注意事項） 
樣品處理：
1.收集2~3ml （約3×107細(xì)胞）處于對數(shù)生長期的酵母培養(yǎng)物到離心管中，12，000rpm離心30秒，盡可能吸棄上清。
2.加入300μl緩沖液SE中（已添加β-巰基乙醇），輕柔吹打細(xì)胞；根據(jù)酵母量加入50μl Lytic Enzyme，充分顛倒混勻，37°C水浴15~30分鐘消化細(xì)胞壁，中間可顛倒數(shù)次幫助消化。
破壁效果不好會導(dǎo)致RNA產(chǎn)量低，可以加大lytic Enzyme 用量來提高酶工作濃度，還可以延長消化時間或者提高溫度到45°C來提高效果，不適合Lytic Enzyme消化的酵母可選用其它方法如0.5mm玻璃珠渦旋擊打 ，反復(fù)凍融等方式破除細(xì)胞壁。

提取步驟：
1.13,000 rpm離心1分鐘，吸棄上清。
2.加入350μl裂解液RLT（已添加β-巰基乙醇），吹打混勻后劇烈振蕩20秒，充分裂解。（如果有明顯團(tuán)塊或者不溶物可以將裂解物13，000rpm離心3分鐘,將裂解物上清全部轉(zhuǎn)到一個新離心管再進(jìn)行下一步。）
3.加入上清液等體積70%乙醇（DEPC水配制）立即吹打混勻。（不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能會黏附在槍頭的外壁，注意不能將其帶入離心管中。）
4.將混合溶液轉(zhuǎn)入套有吸附柱RA的離心管中，13,000 rpm離心30~60秒，棄掉廢液。
5.加700μl 去蛋白液RW1，室溫放置30秒，12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。
6.加入500μl漂洗液RW（請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。
7.重復(fù)步驟6一次。
8.將吸附柱RA放回收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
9.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液），放入新的RNase-free離心管中，在吸附膜的中間部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O室溫靜置1分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。取得RNA后，將RNA溶液保存在－80°C，防止降解。
 
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